【摘 要】
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目的建立犬肾细胞(MDCK)、人喉表皮癌细胞(HEp-2)和非洲绿猴肾细胞(Vero)3种细胞(MHV)混合细胞瓶冻存复苏方法,经冻存复苏的混合细胞用于分离常见呼吸道和肠道病毒,建立病毒
【机 构】
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复旦大学公共卫生学院流行病学教研室,上海市闵行区疾病预防控制中心
【基金项目】
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“十一五”国家科技重大专项(2009ZX10004-104);上海市科委资助项目(09DZ1906605)
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目的建立犬肾细胞(MDCK)、人喉表皮癌细胞(HEp-2)和非洲绿猴肾细胞(Vero)3种细胞(MHV)混合细胞瓶冻存复苏方法,经冻存复苏的混合细胞用于分离常见呼吸道和肠道病毒,建立病毒性病原检测的方法学平台。方法对数生长期的MDCK、HEp-2和Vero细胞等量保存在含8%二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DM-SO)冷冻保存液中,液氮经冻存4个月后复苏并进行细胞计数;在复苏后0 h、24 h和48 h倒置显微镜下观察细胞形态、细胞汇合;并用于分离培养常见呼吸道、肠道病毒,观察致细胞病变效应,采用直接与间接免疫荧光法鉴定。结果在液氮中保存4个月的MHV混合细胞,细胞复苏存活率超过99.20%,镜下细胞折光度好,细胞形态良好,均见到相应的致细胞病变效应和免疫荧光检测阳性结果。结论 MDCK、HEp-2和Vero细胞等量保存在含8%DM-SO冷冻保存液中液氮保存4个月复苏存活率高。混合细胞直接冻存复苏方法建立,为常见的病毒性病原分离培养提供了宽泛的合适细胞宿主,保证了病毒性传染病的快速诊断、实验室病毒性传染病监测的可操作性。
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