【摘 要】
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目的探讨应用Sox-9和igf-1基因转染大鼠脂肪干细胞(ADSCs)后,目的基因和蛋白分泌情况及向软骨细胞的分化效果。方法扩增、提取质粒pcDNA3.1-igf-1、pcDNA3.1-Sox-9,分离、纯
【机 构】
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中国医科大学附属盛京医院脊柱关节外科
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目的探讨应用Sox-9和igf-1基因转染大鼠脂肪干细胞(ADSCs)后,目的基因和蛋白分泌情况及向软骨细胞的分化效果。方法扩增、提取质粒pcDNA3.1-igf-1、pcDNA3.1-Sox-9,分离、纯化Wistar大鼠ADSCs,将Sox-9和igf-1基因单独或共转染第3代ADSCs,按转染情况分为5组:未转染组(A组)、转染空载体组(B组)、转染Sox-9组(C组)、转染igf-1组(D组)、Sox-9与igf-1共转染组(E组)。对转染后细胞进行筛选,MTT法测定筛选后细胞的增殖活性,RT-PCR和Western blot法检测筛选后细胞的表达。结果MTT法测定A、B、C、D、E组细胞在490 nm波长处的吸光度(A)值,A、B组与C、D、E组间差异均有统计学意义(P<0.01),但A、B组以及C、D、E组间差异无统计学意义(P>0.05)。RT-PCR和Western blot检测目的基因和蛋白的表达量,Sox-9表达以C组最多;igf-1表达以E组最多;II型胶原表达以E组最多。结论通过Sox-9和igf-1基因共同转染ADSCs修复软骨缺损是一个较有前景的发展方向。
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