【摘 要】
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目的 筛选特异性强、亲和力高的抗猪隐孢子虫(Cryptosporidium suis)单克隆抗体(McAb),并探讨其生物学活性.方法 将纯化的猪隐孢子虫卵囊冻融和超声波处理后免疫BALB/c小鼠,
【机 构】
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河南农业大学牧医工程学院,郑州,450002;河南省动物疫病预防控制中心,郑州,450008
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目的 筛选特异性强、亲和力高的抗猪隐孢子虫(Cryptosporidium suis)单克隆抗体(McAb),并探讨其生物学活性.方法 将纯化的猪隐孢子虫卵囊冻融和超声波处理后免疫BALB/c小鼠,取阳性免疫鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合;经间接ELISA法筛选,有限稀释法进行克隆;用间接ELISA叠加试验、间接免疫荧光试验鉴定McAbs的免疫反应活性.结果 获得 3 株能稳定分泌抗猪隐孢子虫McAbs的杂交瘤细胞株,命名为1E1C5、1E11A5、 2B7A1,分别属于IgM、IgG3和IgG2a类;其细胞培养上清效价分别为1∶3 200、1∶1 600和1∶3 200,小鼠腹水效价分别为1∶1.6×105、1∶1.6×105和1∶0.8×105;ELISA 叠加试验表明3 株单抗可识别两个不同抗原位点,1E1C5有较高的亲和力;免疫荧光试验结果显示 3 株单抗均能与猪隐孢子虫卵囊壁反应,但与艾美耳球虫、人隐孢子虫(C.hominis)有微弱的交叉反应.结论 获得了3株可识别猪隐孢子虫卵囊壁的McAbs,为进一步开展猪隐孢子虫快速诊断研究奠定了基础.
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