【摘 要】
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本研究将伪狂犬病病毒变异株JS-2012的基因UL11、UL16和UL21分别克隆至原核表达载体中,并且在E.coli中分别表达了重组的His-UL11、His-UL16和His-UL21蛋白.结果表明,这三个重组蛋白均主要以包涵体的形式表达.通过尿素洗涤包涵体的方式分别纯化3个重组蛋白,将纯化后的蛋白分别免疫BALB/c小鼠,4次免疫后成功制备出能特异性识别重组蛋白UL11、U16和UL21的多克隆抗体.蛋白免疫印迹和间接免疫荧光结果表明,本研究制备的3个多克隆抗体均具有良好的免疫原性,能够与伪狂犬病病
【机 构】
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中国农业科学院上海兽医研究所,上海200241;中国农业科学院上海兽医研究所,上海200241;江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心,扬州225009
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本研究将伪狂犬病病毒变异株JS-2012的基因UL11、UL16和UL21分别克隆至原核表达载体中,并且在E.coli中分别表达了重组的His-UL11、His-UL16和His-UL21蛋白.结果表明,这三个重组蛋白均主要以包涵体的形式表达.通过尿素洗涤包涵体的方式分别纯化3个重组蛋白,将纯化后的蛋白分别免疫BALB/c小鼠,4次免疫后成功制备出能特异性识别重组蛋白UL11、U16和UL21的多克隆抗体.蛋白免疫印迹和间接免疫荧光结果表明,本研究制备的3个多克隆抗体均具有良好的免疫原性,能够与伪狂犬病病毒变异株JS-2012的UL11、UL26、UL21蛋白发生特异性反应.这3种抗体为伪狂犬病病毒被膜蛋白的功能和相互作用研究提供了重要的工具.
其他文献
丝裂原相关蛋白激酶(MAPK)信号通路在血吸虫的发育和产卵过程中发挥重要的调节作用,已有研究表明p38MAPK可调控曼氏血吸虫的发育,并参与雌性成熟过程.为此,本研究对日本血吸虫p38MAPK(Sjp38MAPK)进行了克隆、表达,并对其功能进行了初步分析.结果表明:Sjp38MAPK长度1038 bp,预测分子量39.58 kDa;生物信息学分析表明Sjp38MAPK与曼氏血吸虫和埃及血吸虫的同源性分别为93％和90％;qRT-PCR分析表明Sjp38MAPK在成虫中的表达量较高于虫卵、尾蚴和童虫时期;
本研究对疑似禽腺病毒感染的鸡病料进行了病毒分离、PCR扩增基因与序列分析以及动物回归试验.结果显示:分离的病毒为球形、无囊膜,直径在70～80 nm,不具有凝集红细胞能力;毒株基因组全长43634 bp,与Ⅰ群禽腺病毒同源性介于95.8％～99.7％,与Ⅱ群和Ⅲ群禽腺病毒同源性为34.4％～37.3％;毒株对3周龄SPF鸡的致死率为100％,死亡鸡可见典型的心包积液与包涵体肝炎症状,肝细胞染色可见嗜碱性包涵体.结果表明,本研究成功分离到1株Ⅰ群禽腺病毒C基因型血清4型病毒,命名为FAdV-4 SN2016
为了建立一种能快速检测非洲猪瘟的免疫胶体金方法,本实验根据非洲猪瘟病毒(ASFV)的p54基因的成熟肽序列,设计了有终止子(p54)和无终止子(p54-his)的基因片段,并分别在pET30a载体中进行表达;将纯化后p54或p54-his免疫ASFV抗体阴性猪,制备相应多克隆抗体,4次免疫后用p54-his或p54检测多克隆抗体效价;根据胶体金免疫层析原理,用金颗粒标记纯化的p54抗原作为金标垫,SPA为检测线、p54多克隆抗体为质控线,优化条件,制作胶体金免疫层析试纸;最终用p54-his的多克隆抗体检
分析经NDV感染HeLa细胞分泌外泌体microRNA表达变化,以期为外泌体microRNA在NDV感染中的具体作用机制提供初步的理论基础.采用经典差速离心法分离提取对照组与NDV感染组的HeLa细胞来源外泌体,经miRCURYTM Array芯片分析两组microRNA的表达谱后,通过Targetscan预测表达差异miRNA的可能靶基因,并利用DAVID、KEGG等在线预测工具对差异microRNA靶基因进行Go功能分析.相比于对照组,NDV感染组HeLa细胞外泌体中共有234个microRNA发生了
从安徽合肥一养殖户送检的临床样品中分离到一株鸡传染性支气管炎病毒,命名为HF200702.分离株在鸡胚盲传3代过程中可引起典型的侏儒胚现象;基于分离株S1基因序列对毒株进行分型结果显示,分离株属于目前流行的QX型,与H120、M41、4/91、QX等疫苗株的同源性分别为76.1％、75.6％、78.3％、95.0％;用分离株第10代鸡胚尿囊液感染1日龄SPF雏鸡,对雏鸡的致死率为41.6％,感染鸡出现精神沉郁、张口呼吸、气管啰音等临床症状以及气管纤毛摆动停滞、肾脏肿大、尿酸盐沉积等病理变化.感染鸡从感染后
为探索RNAi技术在鸭病毒性肝炎防控中的作用,本研究将筛选出的沉默RdRp效果较好的shRNA1、shRNA2和突变体shRNA-NC分别插入pPLK/GFP/+Puro载体,构建慢病毒载体pPLK-shRNA-RdRp-1、pPLK-shRNA-RdRp-2、pPLK-shRNA-NC,制备重组慢病毒Lenti-shRNA-RdRp-1、Lenti-shRNA-RdRp-2、Lenti-shRNA-NC;将重组慢病毒单独或者联合接种鸭胚成纤维细胞后感染DHAV-1,应用荧光定量PCR的方法检测感染DHA
为深入研究犬博卡病毒(MVC)结构蛋白VP1及其抗体在MVC感染及致病分子机制中的作用,本研究以先期构建的MVC感染性克隆载体pI-MVC为模板,构建VP1结构蛋白(独特区)原核表达载体pET32a(+)-VP1N,转化于大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达后进行蛋白可溶性分析;用镍柱亲和层析法纯化诱导表达产物,以纯化的VP1N融合蛋白作为抗原免疫新西兰大白兔,获得特异性抗VP1N多克隆抗体;通过ELISA的方法测定VP1N多克隆抗体效价,并采用Western blot和免疫荧光鉴定VP
为了解副猪嗜血杆菌感染猪后的组织分布和排毒情况,应用建立的SYBR GreenⅡ荧光定量PCR检测方法,分析了副猪嗜血杆菌在猪各组织的分布及其在血液、鼻拭子中载量的变化情况.结果显示:高剂量感染组出现明显的临床症状,且平均体温高于其他各组1～2℃;对试验组各组猪内脏组织进行检测发现,副猪嗜血杆菌主要集中在气管、扁桃体、颌下淋巴结、肺等组织中,不同组织器官中的细菌载量也存在着一定的差异;血液中并未检测到副猪嗜血杆菌,但在感染的8～20 d高剂量组鼻拭子中副猪嗜血杆菌的载量显著高于其他组.本文研究了副猪嗜血杆
本研究旨在克隆犬乳腺组织中犬乳铁蛋白(LTF)基因CDS序列并进行详尽的生物信息学分析,为下一步的研究奠定基础.从犬乳腺组织中扩增得到LTF CDS全长,并克隆至pGEX-4T-1原核表达载体,利用双酶切与测序验证重组质粒pGEX-4T-LTF,最后使用生物信息学软件对LTF进行生物信息学分析.结果显示,成功克隆了全长2127 bp的LTF的CDS;LTF属于可溶性蛋白,分子质量为77 kDa,等电点为8.62;二级结构中α-螺旋(Hh)占36.44％,延长链(Ee)占15.11％,无规则卷曲(Cc)占4
为了解消毒剂对活病毒的消杀效果,本研究利用伪狂犬病病毒与非洲猪瘟病毒理化特征的相似性,以伪狂犬病病毒野毒株作为模拟感染毒株,以细胞和小鼠作为感染宿主建立了消毒剂评估模型,并分别对四类消毒剂的最低有效浓度、最少消杀时间、干扰物的影响(油脂、蛋白和血清)、高温和低温等纬度建立了活病毒消杀效果的评估方法.结果显示:戊二醛类消毒剂性价比最高,但所需消杀时间较长,受低温和干扰物的影响严重;过硫酸氢钾复合物粉不受低温影响,但会受到血清和蛋白质的干扰;复合液体酸化剂消杀所需时间仅需1 min,不受温度和干扰物的影响.以