【摘 要】
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基因敲除的胚胎干细胞模型在基因功能的研究中起着重要作用.为了建立一套在胚胎干细胞中简便高效纯合敲除基因的方法,以Cyp26s基因家族为例,应用CRISPR-Cas9基因修饰技术,对
【机 构】
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杭州师范大学生命与环境科学学院,九江学院药学与生命科学学院
【基金项目】
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国家自然科学基金项目(31101046),浙江省自然科学基金项目(LY15C070005),杭州农业科研主动设计项目(20162012A07).
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基因敲除的胚胎干细胞模型在基因功能的研究中起着重要作用.为了建立一套在胚胎干细胞中简便高效纯合敲除基因的方法,以Cyp26s基因家族为例,应用CRISPR-Cas9基因修饰技术,对靶向gRNA设计、细胞筛选、阳性克隆鉴定等过程进行了优化.结果表明,通过双位点靶向gRNA设计,转染线性化的质粒,G418筛选7d,sgRNA位点外侧设计鉴定引物等策略,在4周内获得了3株纯合敲除Cyp26s基因(Cyp26a1-/-、Cyp26b1-/-和Cyp26c1-/-)的ES细胞系.
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