【摘 要】
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目的 研究宿主铁元素吸收相关转铁蛋白受体1(transferrin receptor,TfR1)对结核分枝杆菌(Mycobacterium tubercu-losis,M.tb)胞内生存的影响,探讨其成为抗结核新靶点的可能.方法 采用免疫组化和蛋白质免疫印迹技术对不同剂量铁过载小鼠以及M.tb感染小鼠肺组织切片和肺部组织研磨液上清TfR1表达丰度进行检测,提取肺组织总RNA并进行TfR1基因qPCR验证.siRNA技术构建TfR1--RAW 264.7巨噬细胞系,以FITC标记的耻垢分枝杆菌(FITC-M
【机 构】
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102629 北京,中国食品药品检定研究院结核病疫苗和过敏原产品室、中国医学科学院生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室;317500 温州医科大学附属温岭医院呼吸与危重症医学科;100021 中国
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目的 研究宿主铁元素吸收相关转铁蛋白受体1(transferrin receptor,TfR1)对结核分枝杆菌(Mycobacterium tubercu-losis,M.tb)胞内生存的影响,探讨其成为抗结核新靶点的可能.方法 采用免疫组化和蛋白质免疫印迹技术对不同剂量铁过载小鼠以及M.tb感染小鼠肺组织切片和肺部组织研磨液上清TfR1表达丰度进行检测,提取肺组织总RNA并进行TfR1基因qPCR验证.siRNA技术构建TfR1--RAW 264.7巨噬细胞系,以FITC标记的耻垢分枝杆菌(FITC-Mycobacterium smegmatis,FITC-M.smegmatis)和M.smegmatis进行巨噬细胞吞噬和杀伤功能实验,并通过流式细胞术和细菌培养菌落计数方法进行检测分析.结果 低剂量、中剂量和高剂量铁剂小鼠肺组织TfR1表达水平与阴性对照小鼠差异无统计学意义.M.tb感染后,铁过载M.tb感染小鼠和单纯M.tb感染小鼠肺组织TfR1表达均显著上调,且前者TfR1的表达丰度显著高于后者.下调RAW 264.7巨噬细胞TfR1表达水平后,TfR1-/-与TfR1+/+RAW 264.7巨噬细胞在1、2和4h吞噬FITC-M.smegmatis数量组间差异无统计学意义.M.smegmatis感染后24、48和72h后,TfR1-/-RAW 264.7巨噬细胞杀伤功能则明显优于TfR1+/+RAW 264.7巨噬细胞,胞内残余活M.smegmatis数量显著低于未转染的TfR1+/+正常细胞.结论 TfR1参与了M.tb的侵染,并可能与M.tb获取铁元素以利其在胞内生存有关;TfR1的下调不影响M.tb的入侵,但抑制其在巨噬细胞内的增殖.
其他文献
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目的 比较美迪斯可弯曲喉罩与Ambu AuraFlex可弯曲喉罩应用于小儿眼科手术麻醉的效果.方法 择期行全身麻醉眼科手术患儿80例,性别不限,ASAⅠ ～Ⅱ级,年龄1～5岁,体重≥10kg,术前评估无困难气道指征,采用随机数字表法将患儿分为美迪斯喉罩组(M组)与Ambu AuraFlex喉罩组(A组).记录两组喉罩置入耗时、置入次数、手指引导置入率、置入难度、口咽部漏气压、纤维支气管镜下对位情况及术后有无喉罩沾血、声音嘶哑和咽部疼痛等并发症情况.结果 M组气道密封压高于A组(P0.05).结论 美迪斯可
目的 评价早期应用急性生理学评分(acute physiological score,APS)Ⅲ、简化急性生理学评分Ⅱ(simplified acute physiology scoreⅡ,SAPSⅡ)、全身炎症反应综合征评分(systemic inflammatory response syndrome score,SIRS)和Logistic器官功能障碍系统评分(Logistic organ dysfunction score,LODS)4种评分系统对重症监护室(ICU)老年脓毒症患者院内死亡风险的预
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目的 研究长链非编码RNA(long-chain non-coding RNA,lncRNA)CTC-425F1.4在膀胱癌组织中的表达,探讨下调CTC-425F1.4对膀胱癌细胞增殖和侵袭的影响及相关机制.方法 荧光实时定量PCR测定30例膀胱癌组织及癌旁组织、4种膀胱癌细胞株(UM-UC-3、T24、RT4、5637)和正常膀胱上皮细胞SV-HUC-1中CTC-425F1.4表达变化.在RT4细胞中分别转染CTC-425F1.4抑制剂(inhibitor组)和阴性对照序列(control组),荧光实时
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目的 从大鼠泪腺组织分离泪腺上皮细胞并鉴定.方法 采用胶原酶Ⅰ、透明质酸酶和DNA酶混合消化法分离细胞,并对泪腺上皮细胞进行纯化和鉴定.采用胶原预包被培养瓶,并在培养基中添加霍乱毒素(cholera toxin,CT)维持上皮细胞形态.采用细胞免疫荧光染色方法对培养的泪腺细胞主要标志物进行鉴定,包括上皮细胞标志物细胞角蛋白(cytokeratin,CK)和E-钙黏蛋白(E-cadherin,E-Cad),间充质细胞标志蛋白波形蛋白(vimentin,Vim),肌上皮细胞标志蛋白 α-SMA和S100蛋白.
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