目的：利用网络药理学预测补肾活血汤干预乳腺癌内分泌治疗相关骨质疏松的潜在作用机制，并通过体外细胞模型进行实验验证。方法首先通过网络药理学筛选补肾活血汤的主要有效化学成分和作用靶点，进一步获取乳腺癌内分泌治疗相关骨质疏松相关的疾病靶点。将二者的共同靶点信息进行基因本体（GO）功能注释和京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析。其次利用生存分析网站（Kaplan-MeierPlotter）对关键靶点进行生存分析。最后通过体外实验噻唑蓝（MTT）比色法评估细胞增殖抑制活性，蛋白免疫印迹法（Westernblot）验证关键靶点及通路，并使用实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-timePCR）评估关键靶点mRNA表达。结果网络药理学研究共获得补肾活血汤活性成分716个，关键靶点249个，补肾活血汤和乳腺癌内分泌治疗相关骨质疏松的共同靶点135个，其中蛋白激酶B（Akt）1、低氧诱导因子1A（HIF1A）是两个关键靶点，靶点共涉及生物过程531种，细胞组成62种，分子功能162种，参与乳腺癌、内分泌抵抗等细胞信号通路145条；靶点有效地富集在磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/Akt和HIF-1两条信号通路。体外实验中，MTT比色法显示，与空白组相比，22.5、45、90g·L-1以及45、90、180g·L-1质量浓度的补肾活血汤作用48h后分别能不同程度的降低人LuminalA型乳腺癌细胞系MCF-7和T47D细胞增殖率和细胞运动能力。将0、15、60g·L-1的补肾活血汤干预MCF-7细胞48h，Westernblot实验表明，与空白组比较，不同质量浓度的补肾活血汤作用于MCF-7细胞中p-PI3K、PI3K、p-Akt、Akt和HIF-1α相对表达水平均降低（P<0.05，P<0.01，P<0.001，P<0.000 1），且呈浓度依赖性。采用Real-timePCR检测关键靶点HIF-1α的mRNA表达，结果显示随浓度升高MCF-7细胞中HIF-1α的mRNA表达显著降低（P<0.01，P<0.001），且呈浓度依赖性。结论补肾活血汤通过PI3K/Akt/HIF-1信号通路作用于关键靶点Akt1、HIF1A，进而干预乳腺癌内分泌治疗相关的骨质疏松。