论文部分内容阅读
目的 构建CblN／Grb2嵌合分子，表达和纯化GST-CblN／Grb2融合蛋白，并考察嵌合分子CblN／Grb2在体外是否具有泛素连接酶活性。方法 提取SKBR-3细胞的总RNA并反转录为cDNA，作为模板用PCR扩增Grb2基因的SH2片段；含有人全长CblcDNA的质粒pEFHACbl作为模板扩增Cbl基因№端（cblN）；用重叠延伸PCR方法，在CblN内部SH2两端引入BamHⅠ和EcoRⅤ酶切位点并克隆入pcDNA3．1（＋）。再以Grb2基因的SH2置换CblN的SH2即成为pcDNA3．