【摘 要】
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目的 探讨重组腺相关病毒介导的HDV核酶在细胞内抑制乙型肝炎病毒基因表达的作用.方法 将针对HBV基因序列C区的反式HDVRz与U6启动子和绿色荧光蛋白基因EGFP及其启动子CMV共同
【机 构】
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山东省医药生物技术研究中心固家卫生部生物技术药物重点实验室
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目的 探讨重组腺相关病毒介导的HDV核酶在细胞内抑制乙型肝炎病毒基因表达的作用.方法 将针对HBV基因序列C区的反式HDVRz与U6启动子和绿色荧光蛋白基因EGFP及其启动子CMV共同插入腺相关病毒载体pSNAV中并取代其原有CMV启动子区域,构建为pSNAV-CRz重组载体.并将pSNAV-CRz、pSNAV及pLEGFP质粒转染HepG2.2.15培养细胞,荧光显微镜下观察绿色荧光,对转染后培养细胞内蛋白进行HBeAg和HBsAg的ELISA分析.结果 所构建的重组载体经双酶切及PCR验证与实验设计一致.重组载体转染培养细胞后,荧光显微计数表明,pSNAV-CRz的转染效率为30%.HBeAg和HBsAg的ELISA检测显示,pSNAV-CRz重组载体对HepG2.2.15细胞中HBV病毒的HBeAg和HBsAg表达抑制率分别为63.5%和50.07%.结论 细胞水平试验证明,重组腺相天病毒载体介导的反式HDVRz在体外培养细胞水平对HBV的复制起到一定的抑制作用.
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