【摘 要】
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旨在建立一种通过高分辨率熔解曲线（high-resolution melting,HRM）分析技术快速检测CRISPR/Cas9介导的细胞基因突变的方法。采用野生型、纯合突变及杂合突变小鼠胚胎干细胞优化和完善HRM检测条件，然后应用建立的HRM方法对30个测序结果已知的CRISPR/Cas9技术编辑过的小鼠胚胎干细胞单克隆进行检测，根据熔解温度与熔解曲线的差异区分野生型、纯合突变型及杂合突变型，以
【机 构】
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贵州医科大学基础医学院免疫学教研室组织工程与干细胞实验中心
【基金项目】
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国家自然科学基金项目（32000601,81871313）； 贵州医科大学博士启动基金，院博合J字[2018]016号;贵州医科大学学术新苗计划，黔科合平台人才[2018]5779-74；
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旨在建立一种通过高分辨率熔解曲线（high-resolution melting,HRM）分析技术快速检测CRISPR/Cas9介导的细胞基因突变的方法。采用野生型、纯合突变及杂合突变小鼠胚胎干细胞优化和完善HRM检测条件，然后应用建立的HRM方法对30个测序结果已知的CRISPR/Cas9技术编辑过的小鼠胚胎干细胞单克隆进行检测，根据熔解温度与熔解曲线的差异区分野生型、纯合突变型及杂合突变型，以验证HRM方法的可行性和准确性。结果表明，优化的HRM检测方法能够鉴别野生型、纯合突变型及杂合突变型小鼠胚胎干细胞。应用建立的HRM方法分析30个CRISPR/Cas9技术编辑过的小鼠胚胎干细胞单克隆，结果显示，14个单克隆为杂合突变型、2个单克隆为纯合突变型、14个单克隆为野生型，与测序结果一致，准确率为100%。本研究建立的高分辨率熔解曲线法能对CRISPR/Cas9介导的细胞基因突变进行快速筛选，是一种灵敏、准确、简便、高通量的方法。
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