观察中药火把花根对急性肺损伤(ALI)大鼠支气管上皮紧密连接蛋白claudin-2和ZO-1表达的影响,探讨火把花根对ALI的保护机制。
方法将24只健康成年清洁级雄性SD大鼠按随机数字表法分为对照组、ALI组、火把花根预处理组,每组8只。经尾静脉注射油酸0.04 mL/kg复制大鼠ALI模型,对照组注射等量生理盐水(NS);火把花根预处理组于制模前10 d连续灌胃药物600 mg·kg-1·d-1(2 mL),对照组和ALI组灌胃等量NS。制模后4 h取腹主动脉血、收集支气管肺泡灌洗液(BALF),测定血浆及BALF中蛋白含量,计算肺通透性指数(LPI);处死大鼠取肺组织,测定肺湿/干质量(W/D)比值,苏木素-伊红(HE)染色后光镜下观察肺组织病理学变化,并进行肺损伤评分(LIS);应用免疫组化法观察支气管黏膜上皮claudin-2和ZO-1的阳性表达及定位;应用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测支气管黏膜上皮claudin-2和ZO-1的蛋白表达。
结果镜下显示:与对照组比较,ALI组大鼠肺组织损伤明显,细胞水肿,细胞间连接结构紊乱,LIS、W/D及LPI均显著升高〔LIS(分):3.81±0.42比0.40±0.08,W/D:7.68±0.64比4.44±0.39,LPI:0.89±0.15比0.38±0.05,均P<0.01〕;claudin-2和ZO-1主要表达在支气管上皮细胞,且ALI组表达强度较对照组明显减弱;Western Blot显示,ALI组claudin-2和ZO-1的蛋白表达较对照组显著下调〔claudin-2蛋白(灰度值):0.43±0.31比2.16±1.33,ZO-1蛋白(灰度值):1.25±0.41比2.82±0.76,均P<0.01〕。与ALI组比较,火把花根预处理可明显改善ALI大鼠肺损伤程度〔LIS(分):1.22±0.39比3.81±0.42,W/D:4.62±0.84比7.68±0.64,LPI:0.46±0.07比0.89±0.15,均P<0.01〕,且claudin-2和ZO-1的蛋白表达均明显上调〔claudin-2蛋白(灰度值):2.98±0.91比0.43±0.31,ZO-1蛋白(灰度值):2.35±0.51比1.25±0.41,均P<0.01〕。
结论火把花根可能通过上调支气管上皮细胞紧密连接蛋白claudin-2及ZO-1的表达,以减轻ALI时气道上皮损伤,从而起到肺脏的保护性作用。