【摘 要】
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目的 探讨miR-509对人舌鳞状细胞癌SCC15细胞生物学行为的影响及对二磷酸腺苷-核糖基化因子6(adenosine diphosphate-ribosylation factor 6,ARF6)信号通路的调控作用.方法 取对数生长期SCC15细胞,随机分为miR-509 mimic 组(转染 miR-509 mimic)、miR-509 inhibitor 组(转染 miR-509 inhibitor)、mimic NC 组(转染 mimic NC)、inhibitor NC组(转染inhibito
【机 构】
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华北理工大学附属医院口腔正畸修复科,河北唐山 063000;秦皇岛市军工医院口腔科,河北秦皇岛 066000;保定市第三中心医院功能科,河北保定 071000
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目的 探讨miR-509对人舌鳞状细胞癌SCC15细胞生物学行为的影响及对二磷酸腺苷-核糖基化因子6(adenosine diphosphate-ribosylation factor 6,ARF6)信号通路的调控作用.方法 取对数生长期SCC15细胞,随机分为miR-509 mimic 组(转染 miR-509 mimic)、miR-509 inhibitor 组(转染 miR-509 inhibitor)、mimic NC 组(转染 mimic NC)、inhibitor NC组(转染inhibitor NC)、对照组(仅转染脂质体).转染24 h,5组采用实时荧光定量PCR法检测miR-509相对表达量,采用流式细胞术检测细胞凋亡,采用Transwell小室试验检测细胞侵袭能力,采用Western blot法检测ARF6蛋白相对表达量.采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-509与ARF6的靶向关系.结果 miR-509 mimic组miR-509相对表达量(6.17±0.25)、细胞凋亡率[(12.46±0.37)％]均高于对照组[4.28±0.36,(3.08±0.30)％]和mimic NC 组[4.25±0.34、(2.98±0.41)％](P＜0.05),侵袭细胞数[(8.82±2.07)个]少于对照组[(27.40±3.26)个]和 mimic NC 组[(28.36±3.14)个](P＜0.05),ARF6蛋白相对表达量(0.27±0.05)低于对照组(0.62±0.05)和mimic NC组(0.64±0.04)(P＜0.05);miR-509 inhibitor 组 miR-509相对表达量(2.50±0.28)、细胞凋亡率[(2.16±0.45)％]均低于对照组和 inhibitor NC 组[4.26±0.33、(3.06±0.24)％](P＜0.05),侵袭细胞数[(125.26±3.36)个]多于对照组和inhibitor NC组[(28.93±2.85)个](P＜0.05),ARF6蛋白相对表达量(0.86±0.06)高于对照组和inhibitor NC 组(0.68±0.06)(P＜0.05);miR-509 inhibitor 组 miR-509相对表达量、细胞凋亡率均低于 miR-509 mimic 组(P＜0.05),侵袭细胞数多于miR-509 mimic组(P＜0.05),ARF6蛋白相对表达量高于miR-509 mimic组(P＜0.05);对照组、mimic NC组和inhibitor NC组miR-509相对表达量、细胞凋亡率、侵袭细胞数、ARF6蛋白相对表达量比较差异均无统计学意义(P＞0.05).ARF6 WT+miR-509 mimic 组荧光素酶活性(0.52±0.17)低于 ARF6 WT+mimic NC 组(1.55±0.22)(t=6.417,P＜0.001);ARF6 MUT+miR-509 mimic 组荧光素酶活性(1.53±0.26)与 ARF6 MUT+mimic NC组(1.56±0.25)比较差异无统计学意义(t=0.144,P=0.892).结论 miR-509上调可促进人舌鳞状细胞癌SCC15细胞凋亡、抑制其侵袭,可能通过靶向抑制ARF6蛋白表达发挥作用.
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