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摘要： 阴道真菌多为白色假丝酵母菌，偶见阴道纤毛菌、放线菌等，使人类致病者85％为白色念珠菌。阴道念珠菌病的診断要结合典型症状和体征及真菌学检查。培养和镜检的敏感性和可靠性不同，前者达90％，后者仅为40％，涂片应取阴道后壁的分泌物(如有菌丝中可确诊为感染而非带菌)。
关键词： 念珠菌；检测方法；质量控制 【中图分类号】R446 【文献标识码】B 【文章编号】1672-8602(2014)03-0213-01
念珠菌病是由念珠菌引起的一种最常见的真菌病。最常见的致病菌为白色念珠菌，常存在于正常人的口腔、皮肤、阴道和消化道内，因此念珠菌病多为内源性感染，属条件致病菌。阴道真菌有时在阴道中存在而无害，但在阴道抵抗力减低时容易发病，真菌性阴道炎以找到真菌为诊断依据。阴道真菌多为白色假丝酵母菌，偶见阴道纤毛菌、放线菌等，使人类致病者85％为白色念珠菌。
1 临床资料
2012年6月～2013年6月选取60例妇科门诊送检的阴道分泌物，患者年龄最小18岁，最大53岁，平均年龄38岁。
2 检测方法
2.1 采集:阴道标本采集前24小时，禁止性交、盆浴、阴道检查、阴道灌洗及局部上药等，以免影响检查结果。取材所用消毒的刮板、吸管或棉拭子必须清洁干燥，不粘有任何化学药品或润滑剂。阴道窥器插入前必要时可用少许生理盐水湿润。根据不同的检查目的可自不同部位取材。一般采用盐水浸湿的棉拭子自阴道深部或阴道后部、宫颈管口等处取材，制备成生理盐水涂片以观察阴道分泌物[1]。用生理盐水悬滴可检查滴虫，涂制成薄片以95％乙醇固定，经过巴氏染色、姬姆萨染色或革兰染色，进行肿瘤细胞筛查或病原微生物检查。
2.2 湿片检查:同阴道滴虫检查。必要时于涂片上加1滴2.5mol／L KOH溶液，混匀并加盖玻片，低倍镜下可见到白色假丝酵母菌的卵圆形孢子和假菌丝，再用高倍镜确认。高倍镜下查见单个或成群呈卵圆形、无色透明的孢子，常为芽生或多个连成链状、分枝状，即可报告"查到真菌"。如取阴道分泌物涂片并进行革兰染色后油镜观察，可见到卵圆形革兰阳性孢子或与出芽细胞相连接的假菌丝，呈链状及分枝状。本法简便易行，是目前临床上最常用的方法。
2.3 浓集法检查:取标本于清洁干燥试管内，加2.5mol／L NaOH溶液约1ml，混匀后置37℃水浴中3～5min，取出低速离心5min，取沉淀物作涂片镜检，可提高阳性检出率。
2.4 培养法:将分泌物接种于真菌培养基(如沙保弱培养基)进行分离培养，根据培养特征、形态，以及菌落涂片镜下见到的假菌丝和芽生孢子进行诊断。本法阳性率高，可分离出感染的菌株，但操作复杂、费时，临床应用较少。
3 培养与鉴定
在沙氏培养基上生长情况，于25℃或37℃培养都能生长，呈闪光、软而平滑、高出培养基表面、奶油色、酵母样菌落。陈旧的菌落颜色发深，逐渐变硬，并有皱褶，中央可见气泡，没有气中菌丝，营养菌丝丰富。镜检有假菌丝和大量芽生孢子。在葡萄糖蛋白胨液体培养基上生长情况：于37℃培养48h，白色念珠菌呈管底生长，无菌膜。在血清培养基上生长情况：将纯培养的念珠菌接种到0.5ml～1.0ml正常人或羊血清中，于37℃孵育0.5～3h，白色念珠菌产生芽管，芽管长为细胞的3～4倍，末端的宽度为细胞的1／2[2]。在玉米吐温－80琼脂培养基上生长情况：于25℃孵育24h，白色念珠菌形成许多树枝状菌丝及顶端厚壁孢子。在葡萄糖蛋白胨琼脂中加入0.005％氯化三苯基四氮唑(TZC)，白色念珠菌不变色或仅呈淡红色，其他念珠菌或酵母菌变为红色，热带念珠菌最为明显，呈深红色或紫色。用生理盐水制成待检菌悬液，加于无碳源的培养基中，混匀，倒入平皿内，凝固备用。在平皿培养基中贴附各种碳源的滤纸片(直径6mm滤纸片，灭菌后吸入10％碳源溶液，放37℃温箱蒸干)，置25℃～28℃培养两天观察结果。凡能同化者，在相应的碳源周围可见有一明显生长圈。
4 质量控制
阴道分泌物检查，是女性泌尿生殖系统疾病诊断常做的检查。主要为各种阴道炎、性传播疾病等的诊断提供重要依据。因此，应把好标本的采集送检关，严格控制质量，保证结果的准确性。熟练掌握湿涂片中出现的正常和异常成分的形态及数量变化的意义，如红细胞、成堆的白细胞、真菌和阴道滴虫等在高倍视野的形态变化特征，以高倍视野报告结果，报告应力求准确可靠。取阴道分泌物时应停外用药2～3d，以提高阳性检出率。如所用玻璃器材应干净；涂片做到取材统一或定量，检查及时，观察标准一致，掌握好方法学的各个环节，注意复查；报告方式要力求一致，严格控制各种影响因素[3]。因阴道分泌物检查工作量较大，湿涂片检查因标本不易保存，易污染，送检不方便等，可将阴道分泌物涂片进行瑞－吉或亚甲蓝染色处理，既可用于检查滴虫、真菌、淋球菌、核异质细胞、肿瘤细胞及线索细胞，判定清洁度，还可将涂片较长时间存放，便于复查监督而进行质量控制，建立室内质量控制制度。也可在较大范围开展室间质量评价，以提高阴道疾病实验诊断的整体水平。
参考文献
[1] 朱慧兰, 谷进, 李平，等. 外阴阴道念珠菌病的病原检测及体外药敏检测［J］. 中国抗感染化疗杂志, 2001, 3: 175～176.
[2] 张军民, 席丽艳, 鲁长明，等. 医院分离深部真菌菌株流行病学调查和药敏试验研究［J］. 中华检验医学杂志, 2007, 30: 27～29.
[3] 李若瑜，王端礼.密切结合临床，提高真菌学检验水平.中华检验医学杂志，2003，9（9）:521-523.
关键词： 念珠菌；检测方法；质量控制 【中图分类号】R446 【文献标识码】B 【文章编号】1672-8602(2014)03-0213-01
念珠菌病是由念珠菌引起的一种最常见的真菌病。最常见的致病菌为白色念珠菌，常存在于正常人的口腔、皮肤、阴道和消化道内，因此念珠菌病多为内源性感染，属条件致病菌。阴道真菌有时在阴道中存在而无害，但在阴道抵抗力减低时容易发病，真菌性阴道炎以找到真菌为诊断依据。阴道真菌多为白色假丝酵母菌，偶见阴道纤毛菌、放线菌等，使人类致病者85％为白色念珠菌。
1 临床资料
2012年6月～2013年6月选取60例妇科门诊送检的阴道分泌物，患者年龄最小18岁，最大53岁，平均年龄38岁。
2 检测方法
2.1 采集:阴道标本采集前24小时，禁止性交、盆浴、阴道检查、阴道灌洗及局部上药等，以免影响检查结果。取材所用消毒的刮板、吸管或棉拭子必须清洁干燥，不粘有任何化学药品或润滑剂。阴道窥器插入前必要时可用少许生理盐水湿润。根据不同的检查目的可自不同部位取材。一般采用盐水浸湿的棉拭子自阴道深部或阴道后部、宫颈管口等处取材，制备成生理盐水涂片以观察阴道分泌物[1]。用生理盐水悬滴可检查滴虫，涂制成薄片以95％乙醇固定，经过巴氏染色、姬姆萨染色或革兰染色，进行肿瘤细胞筛查或病原微生物检查。
2.2 湿片检查:同阴道滴虫检查。必要时于涂片上加1滴2.5mol／L KOH溶液，混匀并加盖玻片，低倍镜下可见到白色假丝酵母菌的卵圆形孢子和假菌丝，再用高倍镜确认。高倍镜下查见单个或成群呈卵圆形、无色透明的孢子，常为芽生或多个连成链状、分枝状，即可报告"查到真菌"。如取阴道分泌物涂片并进行革兰染色后油镜观察，可见到卵圆形革兰阳性孢子或与出芽细胞相连接的假菌丝，呈链状及分枝状。本法简便易行，是目前临床上最常用的方法。
2.3 浓集法检查:取标本于清洁干燥试管内，加2.5mol／L NaOH溶液约1ml，混匀后置37℃水浴中3～5min，取出低速离心5min，取沉淀物作涂片镜检，可提高阳性检出率。
2.4 培养法:将分泌物接种于真菌培养基(如沙保弱培养基)进行分离培养，根据培养特征、形态，以及菌落涂片镜下见到的假菌丝和芽生孢子进行诊断。本法阳性率高，可分离出感染的菌株，但操作复杂、费时，临床应用较少。
3 培养与鉴定
在沙氏培养基上生长情况，于25℃或37℃培养都能生长，呈闪光、软而平滑、高出培养基表面、奶油色、酵母样菌落。陈旧的菌落颜色发深，逐渐变硬，并有皱褶，中央可见气泡，没有气中菌丝，营养菌丝丰富。镜检有假菌丝和大量芽生孢子。在葡萄糖蛋白胨液体培养基上生长情况：于37℃培养48h，白色念珠菌呈管底生长，无菌膜。在血清培养基上生长情况：将纯培养的念珠菌接种到0.5ml～1.0ml正常人或羊血清中，于37℃孵育0.5～3h，白色念珠菌产生芽管，芽管长为细胞的3～4倍，末端的宽度为细胞的1／2[2]。在玉米吐温－80琼脂培养基上生长情况：于25℃孵育24h，白色念珠菌形成许多树枝状菌丝及顶端厚壁孢子。在葡萄糖蛋白胨琼脂中加入0.005％氯化三苯基四氮唑(TZC)，白色念珠菌不变色或仅呈淡红色，其他念珠菌或酵母菌变为红色，热带念珠菌最为明显，呈深红色或紫色。用生理盐水制成待检菌悬液，加于无碳源的培养基中，混匀，倒入平皿内，凝固备用。在平皿培养基中贴附各种碳源的滤纸片(直径6mm滤纸片，灭菌后吸入10％碳源溶液，放37℃温箱蒸干)，置25℃～28℃培养两天观察结果。凡能同化者，在相应的碳源周围可见有一明显生长圈。
4 质量控制
阴道分泌物检查，是女性泌尿生殖系统疾病诊断常做的检查。主要为各种阴道炎、性传播疾病等的诊断提供重要依据。因此，应把好标本的采集送检关，严格控制质量，保证结果的准确性。熟练掌握湿涂片中出现的正常和异常成分的形态及数量变化的意义，如红细胞、成堆的白细胞、真菌和阴道滴虫等在高倍视野的形态变化特征，以高倍视野报告结果，报告应力求准确可靠。取阴道分泌物时应停外用药2～3d，以提高阳性检出率。如所用玻璃器材应干净；涂片做到取材统一或定量，检查及时，观察标准一致，掌握好方法学的各个环节，注意复查；报告方式要力求一致，严格控制各种影响因素[3]。因阴道分泌物检查工作量较大，湿涂片检查因标本不易保存，易污染，送检不方便等，可将阴道分泌物涂片进行瑞－吉或亚甲蓝染色处理，既可用于检查滴虫、真菌、淋球菌、核异质细胞、肿瘤细胞及线索细胞，判定清洁度，还可将涂片较长时间存放，便于复查监督而进行质量控制，建立室内质量控制制度。也可在较大范围开展室间质量评价，以提高阴道疾病实验诊断的整体水平。
参考文献
[1] 朱慧兰, 谷进, 李平，等. 外阴阴道念珠菌病的病原检测及体外药敏检测［J］. 中国抗感染化疗杂志, 2001, 3: 175～176.
[2] 张军民, 席丽艳, 鲁长明，等. 医院分离深部真菌菌株流行病学调查和药敏试验研究［J］. 中华检验医学杂志, 2007, 30: 27～29.
[3] 李若瑜，王端礼.密切结合临床，提高真菌学检验水平.中华检验医学杂志，2003，9（9）:521-523.