【摘 要】
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目的 制备人艰难梭菌TcdB抗原表位抗体,建立针对人艰难梭菌TcdB双抗体夹心ELISA检测方法. 方法 通过生物信息学等方法预测人艰难梭菌TcdB蛋白的抗原表位,固相多肽合成法合成
【机 构】
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宁夏医科大学临床医学院,宁夏银川,750004;宁夏医科大学总医院;宁夏医科大学临床医学院,宁夏银川750004
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目的 制备人艰难梭菌TcdB抗原表位抗体,建立针对人艰难梭菌TcdB双抗体夹心ELISA检测方法. 方法 通过生物信息学等方法预测人艰难梭菌TcdB蛋白的抗原表位,固相多肽合成法合成抗原并制备抗体Anti-TcdB1和Anti-TcdB2,ELISA检测效价并验证其特异性.用辣根过氧化物酶(Horseradish peroxidase,HRP)标记TcdB2抗体,建立ELISA双抗体夹心法.利用棋盘滴定法筛选一抗最佳包被浓度、最佳样品稀释倍数及最适二抗工作浓度等条件,优化ELISA检测方法并确定临界值,用已知阳性、阴性标本及重组B蛋白验证该方法的特异性、灵敏度和重复性. 结果 间接ELISA确定Anti-TcdB1的效价为1∶512 000,抗TcdB2抗体为1∶2 048 000.棋盘滴定等方法确定ELISA一抗最佳包被浓度0.5 μg/ml,样品最佳稀释倍数1∶2,酶标抗体最佳稀释度为1∶20 000.该诊断方法特异,不与其它肠道细菌感染出现交叉反应;重组B蛋白最低检测限为32.25 ng/ml;试验的重复性良好,批内和批间变异系数均小于10％. 结论 本研究建立的检测人艰难梭菌TcdB的ELISA双抗体夹心法敏感、特异,重复性良好,可用于鉴别产毒素B艰难梭菌.
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