【摘 要】
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目的：在已有的分泌表达载体pTASH基础之上构建一种更为高效的新型大肠杆菌分泌表达载体,并检验其分泌表达水平是否提高。方法：提取原始质粒pTASH作为模板,用PCR扩增重组水蛭素
【基金项目】
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国家“十一五”科技重大专项资助项目（No.2009ZX09103-653）, 江苏省“六大人才高峰”（第六批）资助项目（20090306）
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目的：在已有的分泌表达载体pTASH基础之上构建一种更为高效的新型大肠杆菌分泌表达载体,并检验其分泌表达水平是否提高。方法：提取原始质粒pTASH作为模板,用PCR扩增重组水蛭素基因表达盒片段以后,再插入到原表达载体pTASH的BamHⅠ位点上,从而产生含有两个串联的水蛭素基因表达盒单元的质粒p（TASH）2,转入大肠杆菌进行摇瓶表达。结果：双表达盒菌种p（TASH）2进行摇瓶水平的培养,其上清液抗凝血酶活性可达3 500 ATU.ml^-1。结论：与单表达盒质粒pTASH的表达水平（2 000 ATU.
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