目的：采用Q Exactive Plus LC-MS/MS定性鉴定豆制何首乌中微量异黄酮类成分，建立豆制何首乌与清蒸何首乌的薄层色谱（TLC）鉴别方法，并考察大豆苷元、染料木素对骨髓间充质干细胞（BMSCs）的增殖作用。方法：采用UPLC-Q-Exactive 高性能四极杆母离子选择性与高分辨准确质量数（HR/AM）Orbitrap 检测相结合的技术定性鉴定目标成分，选用色谱柱Phenomenex C₁₈柱（100 mm×2.1 mm，1.7 μm Phenomenex 公司，美国）；流动相：乙腈（D）-0.1% 甲酸水（A）梯度洗脱，质谱采用负离子监测模式、采用全扫描及二级质谱扫描的功能，对微量目标化学成分进行快速识别；使用硅胶GF₂₅₄ 薄层板对豆制何首乌中黑豆异黄酮类成分进行定性鉴别；采用MTT 法检测大豆苷元、染料木素对BMSCs 的增殖作用。结果：UPLC-Q-Exactive 四级杆-静电场轨道阱高分辨质谱技术，使用少量对照品快速分析鉴定出豆制何首乌中微量的目标成分，具有高效分离及高灵敏检测优势；TLC 鉴别大豆苷元斑点特征明显，专属性强、重复性好，方法简便；染料木素对BMSCs 具有抑制作用，大豆苷元具有促进BMSCs 增殖的作用。结论：豆制何首乌中可检测到异黄酮微量组分，其中大豆苷元为LC-MS 与TLC 较易检测成分，可作为TLC 鉴别豆制何首乌与清蒸何首乌的特征成分，可能为豆制何首乌补血功效增强的药效物质基础之一，可作为其质量控制的指标成分。