【摘 要】
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目的寻找一种适用于培养血管平滑肌细胞总蛋白提取的细胞裂解液配方,以更好地应用于Westernblot分析。方法采用3种常用的细胞裂解液(Ⅰ液,Ⅱ液和Ⅲ液),提取总蛋白后Bradford
【机 构】
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河北医科大学临床学院实验中心,河北师范大学附属中学高中部,河北医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室,河北医科大学第三医院肾内科
【基金项目】
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国家自然科学基金项目(81600576).
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目的寻找一种适用于培养血管平滑肌细胞总蛋白提取的细胞裂解液配方,以更好地应用于Westernblot分析。方法采用3种常用的细胞裂解液(Ⅰ液,Ⅱ液和Ⅲ液),提取总蛋白后Bradford法测定蛋白含量,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离提取的蛋白,Western blot检测PDGFR-β、Akt、GAPDH和SM22α等不同分子量的蛋白表达情况。结果 3种细胞裂解液得到的蛋白含量差异无统计学意义(P>0.05)。小分子量蛋白(<50 000),细胞裂解液Ⅱ和细胞裂解液Ⅲ得到的光密度值高于细胞裂解液Ⅰ(P<0.05);中等分子量蛋白(50 000～80 000),细胞裂解液Ⅱ和细胞裂解液Ⅲ得到的光密度值高于细胞裂解液Ⅰ,细胞裂解液Ⅲ得到的光密度值高于细胞裂解液Ⅱ(P<0.05);高分子量蛋白(>80 000),细胞裂解液Ⅲ得到的光密度值高于细胞裂解液Ⅰ(P<0.05)。Western blot结果显示:PDGFR-β,细胞裂解液Ⅱ和细胞裂解液Ⅲ所检测到的条带光密度值显著高于细胞裂解液Ⅰ(P<0.05);Akt,细胞裂解液Ⅱ和细胞裂解液Ⅲ所检测到的条带光密度值显著高于细胞裂解液Ⅰ,细胞裂解液Ⅲ所检测到的条带光密度值显著高于细胞裂解液Ⅱ(P<0.05);GAPDH,细胞裂解液Ⅱ所检测到的条带光密度值显著高于细胞裂解液Ⅰ和细胞裂解液Ⅲ(P<0.05);SM22α,细胞裂解液Ⅱ所检测到的条带光密度值显著高于细胞裂解液Ⅰ和细胞裂解液Ⅲ(P<0.05)。结论确定了一种裂解效果更好、能满足对不同分子量蛋白进行Western blot检测的裂解液配方,为以Western blot为主的蛋白检测相关研究提供了一定的参考。
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