研究miRNA-29b在胃癌细胞株GC9811及胃癌腹膜高转移潜能细胞株GC9811-P中的表达及其对细胞侵袭、增殖及凋亡能力的影响。
方法通过实时荧光定量PCR测定miRNA-29b在GC9811和GC9811-P细胞中的相对表达量。将GC9811细胞分3组，miRNA-29b下调组转染慢病毒LV-miRNA-29b抑制子，阴性对照组转染空载体，未转染细胞作为空白对照组。将GC9811-P细胞分3组培养，miRNA-29b上调组转染慢病毒LV-miRNA-29b，阴性对照组转染空载体，未转染细胞作为空白对照组。Transwell小室实验检测细胞的侵袭能力，MTT实验检测细胞的增殖能力，平板克隆实验检测细胞的克隆形成能力，流式细胞术检测细胞的凋亡情况。实时荧光定量PCR检测胃癌细胞(GC9811-P、GC9811、MKN28-M、MKN28-NM)中miRNA-29b与富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白(SPARC)基因较正常胃黏膜细胞GES的相对表达水平并进行相关性分析。两样本均数之间的比较采用两独立样本的t检验和SNK-q检验，3组样本均数之间的比较采用单因素方差分析。
结果GC9811-P细胞中miRNA-29b的相对表达量(0.21±0.04)明显低于GC9811细胞(1.00±0.03，t＝28.140，P<0.01)。GC9811细胞转染慢病毒LV-miRNA-29b抑制子后，细胞中miRNA-29b的表达(0.21±0.04)较阴性对照组(0.89±0.07)或空白对照组(1.00±0.04)明显降低(q＝12.76、14.73，P均<0.01)，跨膜细胞数(274.33±9.03)较阴性对照组显著增多(110.67±13.69，t＝9.981，P<0.01)，克隆形成能力明显增强(131.33±4.91比69.67±2.33，t＝11.340，P<0.01)，MTT实验亦显示其增殖能力显著增强。GC9811-P细胞转染慢病毒LV-miRNA-29b后，细胞中miRNA-29b的表达(4.08±0.20)较阴性对照组(1.15±0.05)或空白对照组(1.00±0.10)明显升高(q＝21.73、22.81，P均<0.01)；跨膜细胞数(51.33±5.55)较阴性对照组(104.00±6.24)明显减少(t＝6.305，P<0.01)，MTT实验亦显示其增殖能力明显减弱。细胞凋亡实验证实miRNA-29b具有促进细胞凋亡的趋势，但差异无统计学意义(P>0.05)；胃癌细胞中miRNA-29b和SPARC mRNA的表达呈负相关(r＝–0.97，P＝0.03)。
结论miRNA-29b在胃癌腹膜高转移潜能细胞系中低表达，对胃癌细胞的侵袭和增殖具有抑制作用，miRNA-29b可能成为抑制胃癌腹膜转移的一个新的靶点。