利用CRISPR/Cas9技术创制烟草NtabMYC2基因的定点突变

来源 :分子植物育种 | 被引量 : 0次 | 上传用户:mapgis_2009
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本研究利用CRSIPR/Cas9基因编辑技术,创制了NtabMYC2的不同的定点突变材料.针对Ntab MY C2基因3个敲除靶位点,设计并成功构建了相应的载体.结果表明:3个载体转化烟草后,通过测序验证Ntab MY C2基因被成功敲除了,统计3个载体的敲除成功率分别是24%、2%、10%;T0突变植株经过自交重组产生T1代植株,通过测序分析T1代植株存在4种纯合的NtabMYC2基因突变类型,其分别是多一个A、T、C插入突变和一个缺失4个碱基缺失突变.为进一步研究NtabMYC2基因在烟草中的功能提供了一定的参考价值.“,”CRISPR/Cas9 genome editing technology was applied to create different mutagenesis in NtabMYC2,Three vectors were calculated to edit target sequence.As a result,NtabMYC2 gene was knockout successfully by sequencing.The frequency of mutations at the targeting sites were 24%,2% and 10%.T1 plants,which from self-intersection T0 mutants,was examined by sanger sequencing.There were four homozygous mutations at target sites in NtabMYC2,It were all homozygous insertion mutations that inserted a single A,T and C base,but one homozygous deletion mutation of 4 nucleotide.In this study,we produced mutants materials for further researching NtabMYC2 functions in tobacco.
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