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基于已发表的坏死梭杆菌白细胞毒素启动子区序列，设计3条特异性引物L7、L8和L9。L7和L8分别与Fnn和Fnf的特异性序列结合，L9与两个亚种序列相匹配。分别扩增出1076bp和809bp的特异性片段。试验结果表明，这些引物具有高度的特异性和敏感性，能够检测坏死梭杆菌基因组DNA的最小量为10pg／μL，建立的双重PCR体系可用于区分坏死梭杆菌亚种。