【摘 要】
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本研究构建日本血吸虫26kDa谷胱苷肽转移酶(Sj26)基因的真核表达重组质粒(pcDNA3-Sj26),并探讨其在树突状细胞(DC)中的表达.采用PCR扩增Sj26基因片段,定向克隆至真核表达载体
【机 构】
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华中科技大学同济医学院病原生物学系,武汉,430030;咸宁学院医学院,湖北,咸宁,437100
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本研究构建日本血吸虫26kDa谷胱苷肽转移酶(Sj26)基因的真核表达重组质粒(pcDNA3-Sj26),并探讨其在树突状细胞(DC)中的表达.采用PCR扩增Sj26基因片段,定向克隆至真核表达载体pcDNA3中,阳性克隆经双酶切、PCR扩增鉴定后,双脱氧链末端终止法进行序列测定.用脂质体介导DNA转染法将pcDNA3-Sj26转染DC,G418加压筛选获得阳性克隆并传代培养,用RT-PCR检测Sj26mRNA的转录水平,用SDS-PAGE、Western blot和间接免疫荧光法检测Sj26蛋白在DC中的表达.结果PCR扩增得到特异的Sj26基因片段,双酶切及PCR鉴定表明获得正确的pcDNA3-Sj26重组质粒;测序结果表明,核苷酸序列和推导的氨基酸序列与GenBank报道的Sj26的一致性均为99%;RT-PCR结果显示pcDNA3-Sj26转染的DC中有Sj26基因mRNA的表达,SDS-PAGE和Western blot、间接免疫荧光法显示pcDNA3-Sj26转染的DC中有Sj26的表达.结果证实构建的真核表达重组质粒pcDNA3-Sj26成功的转染至DC中并在DC中获得表达.
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