目的探讨近交系C57BL/6胎鼠皮质神经元体外培养方法,观察其生长情况,并进行鉴定。方法分离孕17 d C57BL/6胎鼠大脑皮质,剪碎吹打,静置取上清液,余组织块以木瓜酶和DNaseI消化,差速贴壁提纯,培养6 h后以添加含谷氨酰胺和B27的Neurobasal培养基继续培养,观察其生长情况,并于体外培养3、5 d时,以神经元特异性核蛋白(neuron specific nuclear protein,NeuN)和微管相关蛋白-2(microtubule-associated protein-2,MAP-2)为标志物,用免疫荧光双染法对分离培养的原代细胞进行鉴定。结果体外培养6 h细胞已贴壁,少量细胞发出1～3个短小突起;此后神经元相继发出突起、并伸长,与邻近细胞突起互相接触,培养5 d突起已互相交织成网;体外培养3、5 d的NeuN阳性细胞率分别为(94.1±5.0)%、(95.0±5.6)%;MAP-2阳性细胞率分别为(96.7±2.9)%、(95.6±5.6)%,NeuN、MAP-2阳性细胞率差异无统计学意义(P>0.05),NeuN和MAP-2鉴定结果一致性好。结论本方法制备的C57BL/6胎鼠皮质原代神经元纯度高,损伤小,生长发育状态良好,无明显增殖性,可作为神经元体外研究的良好实验材料。