【摘 要】
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目的 构建铜绿假单胞菌重组屎肠球菌(Enterococcus faecium,Ef)-PopB疫苗并观察其表达效率. 方法 以铜绿假单胞菌PA01株基因组DNA为模板,PCR扩增PopB基因,然后定向克隆至载体
【机 构】
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重庆医科大学附属第一医院传染病寄生虫病研究所,重庆400016
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目的 构建铜绿假单胞菌重组屎肠球菌(Enterococcus faecium,Ef)-PopB疫苗并观察其表达效率. 方法 以铜绿假单胞菌PA01株基因组DNA为模板,PCR扩增PopB基因,然后定向克隆至载体pGEX-1λT,构建重组质粒pGEX-PopB.将该质粒电穿孔转化Ef,构建rEf-PopB疫苗,抽提质粒,经双酶切和PCR鉴定后,加入异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导其表达,采用SDS-PAGE和Western blot分别对表达产物进行分析和鉴定. 结果 PCR成功扩增出1 200 bp的PopB基因;双酶切证实PopB基因成功插入pGEX-1λT中;PCR证实rEf-PopB疫苗构建成功.SDS-PAGE检测重组疫苗表达相对分子质量约66×103的融合蛋白;Western blot检测Pa感染鼠血清能特异性识别该重组疫苗表达蛋白. 结论 成功构建了rEf-PopB疫苗,其表达产物具有免疫反应性,为Pa疫苗的研制奠定了基础.
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