新型肝癌免疫毒素A54-PE40KDEL的构建表达与活性鉴定

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目的:构建新型肝癌免疫毒素A54-PE40KDEL的原核表达载体,诱导表达后检测其生物活性。方法:PCR扩增绿脓杆菌外毒素APE40KDEL基因插入到pET32a(+),然后与合成的含有肠激酶酶切位点和肝癌特异性结合肽A54的核酸序列连接,构建重组表达载体pET32a(+)-A54-PE40KDEL,其经鉴定后转化E.coli BL21表达。超声破菌,上清液经Ni^+亲和层析纯化,肠激酶酶切,再次Ni^+离子亲和层析后得到免疫毒素A54-PE40KDEL。MTT间接免疫荧光技术检测其对不同细胞株的细胞毒性
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