【摘 要】
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目的探讨低氧诱导因子-1 (HIF-1α)对大鼠主动脉内皮细胞通透性的影响及作用机制。方法构建HIF-1α干扰及过表达载体,应用Lipofectamine 2000转染原代大鼠主动脉内皮细胞,浓
【机 构】
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安徽医科大学第一附属医院烧伤科; 安徽医科大学第一临床医学院; 安徽医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室;
【基金项目】
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2015年度第二批安徽省自然科学基金项目(编号:1508085SMH231);安徽省2018年度重点研究与开发计划项目(编号:1804h08020230)
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目的探讨低氧诱导因子-1 (HIF-1α)对大鼠主动脉内皮细胞通透性的影响及作用机制。方法构建HIF-1α干扰及过表达载体,应用Lipofectamine 2000转染原代大鼠主动脉内皮细胞,浓度为200μg/ml遗传霉素(G418)筛选稳转细胞株,实时荧光定量PCR(RT-PCR)和Western blot检测HIF-1α、内皮素-1(ET-1)、内皮素受体A(ETA)、内皮素受体B(ETB)和闭锁小带(ZO-1)的表达;应用ET-1信号通路抑制剂BQ123及BQ788预处理HIF-1α过表达细胞株1 h,RT-PCR和Western blot检测HIF-1α、ET-1、ETA、ETB和ZO-1的表达,细胞膜通透性实验检测单层内皮细胞膜通透系数变化。结果与转染短发夹RNA-阴性对照组(shRNA-NC组)相比,转染shRNA-Ⅱ组HIF-1α、ET-1、ETA、ETB mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P<0.01),ZO-1的表达则明显升高(P<0.01)。与转染GV230组比较,稳转GV230/HIF-1α组HIF-1α、ET-1、ETA、ETB mRNA和蛋白表达水平均显著升高(P<0.01),ZO-1的表达则明显降低(P<0.01);同时细胞膜通透性系数亦明显升高(P<0.01);应用BQ123和BQ788处理能够抑制HIF-1α诱导的ETA和ETB表达、增强ZO-1的表达,同时细胞膜通透性系数明显降低(P<0.01)。结论 HIF-1α可通过上调ET-1的表达进而增加大鼠主动脉内皮细胞的通透性,HIF-1α/ET-1信号轴在调控烧伤大鼠血管通透性方面具有重要作用。
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