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利用PCR技术,从A型产气英膜梭菌染色体和pEWD299中分别扩增出a毒素(CPA)基因和LTB基因,通过分离、纯化、内切酶酶切、连接和转化,构建了含CPA—LTB融合基因表达质粒的重组菌株BL21(DE3)(pCPA—LTB)。经酶切鉴定和核苷酸序列测定证实,构建的重组质粒pET—CPA含有CPA—LTB融合基因,其基因序列和阅读框架均正确。经EISA检测和SDS—PAGE分析,重组菌株表达的CPA—LTB融合蛋白能够被α、LT毒素抗体所识别。重组菌株BL21(DE3)(pCPA—LTB)经IPTG诱导