一种改良的半定量RT PCR方法

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选用细胞因子IL4 为靶基因, 以β肌动蛋白(βactin) 基因作为内参照, 将两者在同一PCR体系中扩增, 分析PCR扩增的动力学, 内参照βactin 的引物于PCR扩增中的滞后加入, 弥补了IL4 与RTPCR模板量的差异, 使二者的扩增同时处于指数扩增期, 其扩增产物均可在溴乙锭染色的聚丙烯酰胺胶上检测出, 从而可求出IL4 的cDNA 拷贝数占βactin拷贝数的百分比。重复实验的CV 值在10% 以内, 表明此半定量RTPCR 方法的可靠性。 The selection of cytokines IL 4 as a target gene, β actin (β actin) gene as an internal reference, both in the same PCR amplification, analysis of PCR amplification kinetics, internal reference β actin Of the primers in the PCR amplification lag added to make up for the IL  4 and RT  PCR template amount of the difference between the two amplification at the same time in the exponential amplification period of its amplification products are in ethidium bromide staining Polyacrylamide gel detected, which can be obtained IL  4 cDNA copy number accounted for β  actin copy number percentage. CV value of repeated experiments within 10%, indicating the reliability of this semi-quantitative RT PCR method.
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