【摘 要】
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目的：探讨香烟烟雾暴露对大鼠睾丸支持细胞的损伤作用，阐明微小RNA-138-5p（miR-138-5p）在此过程中发挥的保护作用。方法：200只SPF级雄性SD大鼠随机分为对照组和低、中及高剂量香烟暴露组（每天给予每只大鼠10、20和30支香烟），分别于2、4、6、8和12周麻醉处死动物，检测各组大鼠血浆中抑制素B水平，实时荧光定量PCR （RT-qPCR）法检测各组大鼠睾丸组织中miR-138-
【机 构】
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新疆医科大学第五附属医院教学科研办公室和中心实验室
【基金项目】
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新疆维吾尔自治区科技厅特殊环境与健康研究重点实验室开放课题资助项目（SKL-SEHR-2021-05）；
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目的：探讨香烟烟雾暴露对大鼠睾丸支持细胞的损伤作用，阐明微小RNA-138-5p（miR-138-5p）在此过程中发挥的保护作用。方法：200只SPF级雄性SD大鼠随机分为对照组和低、中及高剂量香烟暴露组（每天给予每只大鼠10、20和30支香烟），分别于2、4、6、8和12周麻醉处死动物，检测各组大鼠血浆中抑制素B水平，实时荧光定量PCR （RT-qPCR）法检测各组大鼠睾丸组织中miR-138-5p表达水平，免疫组织化学法检测各组大鼠睾丸支持细胞中波形蛋白表达水平。体外培养睾丸TM4细胞（对照组），将制备好的香烟烟雾提取物（CSE）原液稀释至5%和10%，并处理TM4细胞，作为5%CSE组和10%CSE组。采用MTT法检测各组细胞存活率和各组细胞中乳酸脱氢酶（LDH）活性，流式细胞术和TUNEL法检测各组细胞凋亡率。睾丸TM4细胞转染过表达miR-138-5p质粒后，分为对照组、 5%CSE组、 5%CSE+Pri-miRNA-138-5p Ctrl组、 5%CSE+PrimiRNA-138-5p组、10%CSE组、10%CSE+Pri-miRNA-138-5p Ctrl组和10%CSE+Pri-miRNA-138-5p组，采用上述方法检测各组细胞生存率、细胞中LDH活性和细胞凋亡率。结果：与对照组比较，各剂量香烟暴露组大鼠血浆中抑制素B水平降低；与对照组比较，第8周高剂量香烟暴露组和第12周各剂量香烟暴露组大鼠血浆中抑制素B水平降低（P＜0.05）。光镜下观察，对照组大鼠睾丸细胞胞质出现阳性黄染，香烟暴露组大鼠睾丸TM4细胞中睾丸组织波形蛋白表达水平逐渐降低；与对照组比较，不同时间高剂量香烟暴露组大鼠睾丸TM4细胞中睾丸波形蛋白表达水平降低（P＜0.05）。与对照组比较，第8周时中和高剂量香烟暴露组及12周时各剂量香烟暴露组大鼠睾丸组织中miR-138-5p表达水平均降低（P＜0.05）。与对照组比较，5%CSE组和10%CSE组睾丸TM4细胞存活率明显降低（P＜0.01）。与对照组比较，5%CSE组和10%CSE组大鼠睾丸TM4细胞中LDH活性降低（P＜0.05或P＜0.01）。过表达miR-138-5p后，与对照组比较，5%CSE组、5%CSE+Pri-miRNA-138-5p Ctrl组、5%CSE+Pri-miRNA-138-5p组、 10%CSE组、 10%CSE+Pri-miRNA-138-5p Ctrl组和10%CSE+Pri-miRNA-138-5p组大鼠睾丸TM4细胞增殖率降低（P＜0.05或P＜0.01）；与5%CSE组比较，5%CSE+Pri-miRNA-138-5p组大鼠睾丸TM4细胞增殖率升高（P＜0.05或P＜0.01），细胞凋亡率降低（P＜0.05或P＜0.01）；与10%CSE CSE组比较，10%CSE+Pri-miRNA-138-5p组大鼠睾丸TM4细胞增殖率升高（P＜0.05或P＜0.01），细胞凋亡率降低（P＜0.05）。结论：长期大量香烟烟雾暴露可引起睾丸支持细胞不可逆性损伤，miR-138-5p在其中发挥了重要的保护作用。
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