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[摘要] 目的 探討肾透明细胞癌中转化生长因子-β1、基质金属蛋白酶表达的临床价值。方法 采用免疫组化SP法测定60例肾透明细胞癌（RCCC）及30例正常肾组织中转化生长因子-β1（TGF-β1）和基质金属蛋白酶（MMP2）的表达。结果 TGF-β1和MMP2在RCCC中的阳性表达率为81.6％和86.7％，明显高于正常对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。TGF-β1和MMP2表达RCCC病理分级、临床分期呈明显正相关（P＜0.01）。结论 两者可作为反映RCCC生物学行为的指标，也可作为判断RCCC预后的分子指标。
[关键词] 肾透明细胞癌；转化生长因子-β1；基质金属蛋白酶
[中图分类号] R692[文献标识码] A[文章编号] 1673-9701（2009）12-66-02
肾透明细胞癌（RCCC）是泌尿系统三大恶性肿瘤之一，其转移率较高，有30％的肾透明细胞癌发生骨髓转移。研究表明[1]，MMP2和TGF-β1参与多种肿瘤的转移过程。本文通过观察肾透明细胞癌患者癌与癌旁组织中MMP2和TGF-β1的表达水平，探讨其与肾透明细胞癌病理分级和临床分期之间的关系，为临床诊断和治疗提供理论依据。
1资料与方法
1.1临床资料
选取我院2006年6月～2008年6月收治的RCCC患者60例，其中男42例，女18例，年龄16～80岁，平均年龄（55.6±10.9）岁。癌组织标本进行石蜡包埋，按照2004年WHO病理分级标准进行分级，其中Ⅰ级15例，Ⅱ级23例，Ⅲ级15例，IV级7例；按照2004年WHO临床分期标准进行分期，其中Ⅰ期25例，Ⅱ期18例，Ⅲ期12例，IV期5例。与此同时选取2008年6月后RCCC 30例于术中留取距离癌组织边缘3cm以上的正常肾组织，进行石蜡包埋处理，作为正常对照组。
1.2试剂与方法
1.2.1试剂兔抗人TGF-β1多抗，兔抗人MMP2多抗，均来自南京凯基生物技术有限公司。
1.2.2方法免疫组织化学SP法所有标本均经10％福尔马林固定，石蜡包埋，连续切片，厚度为4μm，每例标本切5张，备免疫组化染色用。采用免疫组化SP法进行免疫组化染色，严格参照试剂盒说明操作。每次染色时均用已知阳性切片作阳性对照，用PBS代替一抗作阴性对照。TGF-β1、MMP2表达均位于胞质和胞膜，表现为浅黄、棕黄或棕褐色。用半定量法评估其染色，无阳性细胞数为（-），阳性细胞数占肿瘤细胞数<25％为（ ），25％-50％为（ ），>50％为（ ）。
1.3统计学处理
通过统计学软件SPSS11.0建立数据库，采用卡方检验及Spearman秩相关分析，以P＜0.05有统计学意义。
2结果
TGF-β1、MMP2表达与病理分级及临床分期之间的关系（如表1）：RCCC中TGF-β1及MMP2阳性表达率分别为81.6％（49/60）、86.7％（52/60），着色见于RCCC细胞质与细胞膜，高于对照组的33.3%（10/30）、23.3％（7/30），P均＜0.05，差异有统计学意义。RCCC中TGF-β1、MMP2表达强度随着病理分级、临床分期的增加，TGF-β1、MMP2表达增强，且均呈明显的相关性。差异均有统计学意义（r=0.689，P＜0.01；r=0.578，P＜0.01及r=0.713，P＜0.01；r=0.601，P＜0.01）。见表1。
3讨论
肿瘤的浸润和转移是恶性肿瘤的主要生物学特征，基底膜（ECM）细胞基质被降解是肿瘤向邻近组织浸润进而远处转移的必要阶段。MMP2为Ⅳ型胶原酶，它通过降解1V型胶原和细胞外基质从而使ECM完整性丧失，促进肿瘤浸润、转移酶[2]。本研究发现，MMP2表达在不同病理分级、不同临床分期肾透明细胞癌组织中的表达水平均较癌旁组织显著增高，提示其在肾透明细胞癌浸润生长的各个阶段均发挥重要作用。同时研究还发现，MMP2表达强度与病理分级及临床分期的相关关系为随着病理分级、临床分期的增加，MMP2表达增强，提示MMP2对RCCC的诊断及预后具有重要的参考价值。TGF-β1在肿瘤生长分化、细胞凋亡等方面发挥重要的作用，是机体抗肿瘤免疫反应的重要抑制因子。有研究表明[3]，TGF-β1在肿瘤发生的初期是肿瘤抑制因子，随后却成为肿瘤的促进剂和转移因子，这可能与TGFq31在肿瘤发生的进程中改变信号传导途径和促进MMP2的分泌有关。
本组研究表明，TGF-β1表达在不同病理分级、不同临床分期肾透明细胞癌组织中的表达水平均较癌旁组织显著增高，且与病理分级及临床分期呈明显的相关性。以上研究均提示TGF-β1、MMP2表达与RCCC恶性进展、侵袭转移能力密切相关，提示TGF-131和MMP2与不良预后有关，两者可作为反映RCCC生物学行为的指标，也可作为判断RCCC预后的分子指标。
[参考文献]
[1] 许景，刘伟国，杨小锋，等. MMP2、MMP9、TIMP1在星形细胞瘤中的表达及其意义[J]. 中华实验外科杂志，2002，19（3）：245-246.
[2] Tjing MY，Van N，Ter JS，et a1．Cytokines in cervicovaginal washing fluid from patients with cervical neoplasia[J]. Cytokine，2001，14（6）：357-360.
[3] 丁国芳，徐银峰，杨最素，等. TGF-I31在前列腺癌中的表达及其与生存率关系的研究[J]. 浙江医学，2006，28（9）：709-711．
（收稿日期：2008-12-29）
[关键词] 肾透明细胞癌；转化生长因子-β1；基质金属蛋白酶
[中图分类号] R692[文献标识码] A[文章编号] 1673-9701（2009）12-66-02
肾透明细胞癌（RCCC）是泌尿系统三大恶性肿瘤之一，其转移率较高，有30％的肾透明细胞癌发生骨髓转移。研究表明[1]，MMP2和TGF-β1参与多种肿瘤的转移过程。本文通过观察肾透明细胞癌患者癌与癌旁组织中MMP2和TGF-β1的表达水平，探讨其与肾透明细胞癌病理分级和临床分期之间的关系，为临床诊断和治疗提供理论依据。
1资料与方法
1.1临床资料
选取我院2006年6月～2008年6月收治的RCCC患者60例，其中男42例，女18例，年龄16～80岁，平均年龄（55.6±10.9）岁。癌组织标本进行石蜡包埋，按照2004年WHO病理分级标准进行分级，其中Ⅰ级15例，Ⅱ级23例，Ⅲ级15例，IV级7例；按照2004年WHO临床分期标准进行分期，其中Ⅰ期25例，Ⅱ期18例，Ⅲ期12例，IV期5例。与此同时选取2008年6月后RCCC 30例于术中留取距离癌组织边缘3cm以上的正常肾组织，进行石蜡包埋处理，作为正常对照组。
1.2试剂与方法
1.2.1试剂兔抗人TGF-β1多抗，兔抗人MMP2多抗，均来自南京凯基生物技术有限公司。
1.2.2方法免疫组织化学SP法所有标本均经10％福尔马林固定，石蜡包埋，连续切片，厚度为4μm，每例标本切5张，备免疫组化染色用。采用免疫组化SP法进行免疫组化染色，严格参照试剂盒说明操作。每次染色时均用已知阳性切片作阳性对照，用PBS代替一抗作阴性对照。TGF-β1、MMP2表达均位于胞质和胞膜，表现为浅黄、棕黄或棕褐色。用半定量法评估其染色，无阳性细胞数为（-），阳性细胞数占肿瘤细胞数<25％为（ ），25％-50％为（ ），>50％为（ ）。
1.3统计学处理
通过统计学软件SPSS11.0建立数据库，采用卡方检验及Spearman秩相关分析，以P＜0.05有统计学意义。
2结果
TGF-β1、MMP2表达与病理分级及临床分期之间的关系（如表1）：RCCC中TGF-β1及MMP2阳性表达率分别为81.6％（49/60）、86.7％（52/60），着色见于RCCC细胞质与细胞膜，高于对照组的33.3%（10/30）、23.3％（7/30），P均＜0.05，差异有统计学意义。RCCC中TGF-β1、MMP2表达强度随着病理分级、临床分期的增加，TGF-β1、MMP2表达增强，且均呈明显的相关性。差异均有统计学意义（r=0.689，P＜0.01；r=0.578，P＜0.01及r=0.713，P＜0.01；r=0.601，P＜0.01）。见表1。
3讨论
肿瘤的浸润和转移是恶性肿瘤的主要生物学特征，基底膜（ECM）细胞基质被降解是肿瘤向邻近组织浸润进而远处转移的必要阶段。MMP2为Ⅳ型胶原酶，它通过降解1V型胶原和细胞外基质从而使ECM完整性丧失，促进肿瘤浸润、转移酶[2]。本研究发现，MMP2表达在不同病理分级、不同临床分期肾透明细胞癌组织中的表达水平均较癌旁组织显著增高，提示其在肾透明细胞癌浸润生长的各个阶段均发挥重要作用。同时研究还发现，MMP2表达强度与病理分级及临床分期的相关关系为随着病理分级、临床分期的增加，MMP2表达增强，提示MMP2对RCCC的诊断及预后具有重要的参考价值。TGF-β1在肿瘤生长分化、细胞凋亡等方面发挥重要的作用，是机体抗肿瘤免疫反应的重要抑制因子。有研究表明[3]，TGF-β1在肿瘤发生的初期是肿瘤抑制因子，随后却成为肿瘤的促进剂和转移因子，这可能与TGFq31在肿瘤发生的进程中改变信号传导途径和促进MMP2的分泌有关。
本组研究表明，TGF-β1表达在不同病理分级、不同临床分期肾透明细胞癌组织中的表达水平均较癌旁组织显著增高，且与病理分级及临床分期呈明显的相关性。以上研究均提示TGF-β1、MMP2表达与RCCC恶性进展、侵袭转移能力密切相关，提示TGF-131和MMP2与不良预后有关，两者可作为反映RCCC生物学行为的指标，也可作为判断RCCC预后的分子指标。
[参考文献]
[1] 许景，刘伟国，杨小锋，等. MMP2、MMP9、TIMP1在星形细胞瘤中的表达及其意义[J]. 中华实验外科杂志，2002，19（3）：245-246.
[2] Tjing MY，Van N，Ter JS，et a1．Cytokines in cervicovaginal washing fluid from patients with cervical neoplasia[J]. Cytokine，2001，14（6）：357-360.
[3] 丁国芳，徐银峰，杨最素，等. TGF-I31在前列腺癌中的表达及其与生存率关系的研究[J]. 浙江医学，2006，28（9）：709-711．
（收稿日期：2008-12-29）