【摘 要】
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建立了一种快速、高效的以睾酮作为探针药物评价细胞色素P450 3A4(CYP3A4)酶活性的高效液相色谱-紫外检测方法。采用的色谱柱为Phenomenex C18柱(4.6mm×150mm,5μm),梯度洗
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建立了一种快速、高效的以睾酮作为探针药物评价细胞色素P450 3A4(CYP3A4)酶活性的高效液相色谱-紫外检测方法。采用的色谱柱为Phenomenex C18柱(4.6mm×150mm,5μm),梯度洗脱,流速1.0mL/min,紫外检测波长245nm,柱温30℃。睾酮与大鼠肝微粒体温孵后,过已活化好的C18固相萃取小柱,收集甲醇洗脱液,于37℃水浴中通N2吹干,用50%甲醇复溶后进样分析测定。研究结果表明,6β-羟基睾酮的保留时间为11.60min,线性范围为0.5~32μg/mL,最低检出质量浓度为0.02μg/mL,提取率为88.41%~92.73%,方法的回收率为99.07%~101.30%;睾酮的保留时间为19.27min,线性范围为0.5~40μg/mL,最低检出质量浓度为0.01μg/mL,提取率为89.59%~92.66%,方法的回收率为96.50%~98.03%。两者的日内、日间相对标准偏差均小于10%,温孵体系中的其他内源性物质不干扰测定。该方法快速、稳定、灵敏度高,适合体外睾酮及其代谢物6β-羟基睾酮的测定,可应用于体外CYP3A4酶活性的评价及酶动力学的研究。
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