【摘 要】
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目的利用流式细胞术（FCM）协助筛选、纯化RNA干扰（RNAi）效率高的人缺氧诱导因子1-α（HIF-1α）基因沉默肝癌细胞株.方法选择带Neor及GFP基因的质粒pGenesil-1.1构建HIF-1α靶向小干扰
【机 构】
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昆明医学院第二附属医院病理科,昆明医学院第二附属医院中心实验室,昆明医学院病理教研室
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目的利用流式细胞术（FCM）协助筛选、纯化RNA干扰（RNAi）效率高的人缺氧诱导因子1-α（HIF-1α）基因沉默肝癌细胞株.方法选择带Neor及GFP基因的质粒pGenesil-1.1构建HIF-1α靶向小干扰RNA（siRNA）重组表达载体,转染人肝癌细胞株SMMC7721.首先用G418筛选,然后用FCM检测出常氧、缺氧条件下HIF-1α蛋白表达抑制效率最高的转基因细胞株.根据FCM可分选GFP阳性细胞这一特点,进一步用流式细胞分选仪分选纯化转基因细胞,最后用PCR和免疫组化方法鉴定纯化细胞株的H
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