【摘 要】
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试验旨在探究低聚壳聚糖硒抗玉米赤霉烯酮(zearalenon,ZEN)对猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)紧密连接蛋白表达的影响.试验分为对照组(C)、ZEN(30 μg/mL ZEN)、ZEN+0.5 Se(30 μg/mL ZEN+0.5 μmol/L低聚壳聚糖硒,以Se计)、ZEN+1.5 Se和ZEN+3 Se组.待细胞长至60％～70％汇合时,ZEN+0.5 Se、ZEN+1.5 Se和ZEN+3 Se组培养液更换为含对应Se浓度的培养液,C和ZEN组更换为正常培养液,12h后向含ZEN组加入30
【机 构】
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天津农学院动物科学与动物医学学院,天津市农业动物繁育与健康养殖重点实验室,天津300384
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试验旨在探究低聚壳聚糖硒抗玉米赤霉烯酮(zearalenon,ZEN)对猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)紧密连接蛋白表达的影响.试验分为对照组(C)、ZEN(30 μg/mL ZEN)、ZEN+0.5 Se(30 μg/mL ZEN+0.5 μmol/L低聚壳聚糖硒,以Se计)、ZEN+1.5 Se和ZEN+3 Se组.待细胞长至60％～70％汇合时,ZEN+0.5 Se、ZEN+1.5 Se和ZEN+3 Se组培养液更换为含对应Se浓度的培养液,C和ZEN组更换为正常培养液,12h后向含ZEN组加入30 μg/mL ZEN,继续培养24 h.收集各组细胞培养液,检测碱性磷酸酶(AKP)活性;Western blotting法检测闭锁连接蛋白(zonula occludens-1,ZO-1)、闭合蛋白(Oceludin)的表达,免疫荧光法检测ZO-1和Occludin蛋白的表达和定位情况.AKP活性检测结果表明,与对照组相比,ZEN、ZEN+ 0.5 Se、ZEN+ 1.5 Se组AKP活性均显著升高(P＜0.05),ZEN+3 Se组AKP活性差异不显著(P＞0.05);与ZEN组相比,ZEN+ 1.5 Se和ZEN+3 Se组AKP活性均显著降低(P＜0.05).Western blotting检测结果表明,与对照组比,ZEN组ZO-1和Occludin蛋白表达水平均显著降低(P＜0.05);与ZEN组比,ZEN+0.5 Se、ZEN+ 1.5 Se和ZEN+3 Se组ZO-1表达水平均差异不显著(P＞0.05),但随着Se浓度的增加,ZO-1表达水平逐渐升高,ZEN+0.5 Se、ZEN+ 1.5 Se、ZEN+3 Se组Occludin表达水平均显著升高(P＜0.05).免疫荧光结果表明,低聚壳聚糖硒可缓解ZEN引起的ZO-1和Occludin蛋白荧光信号减弱现象,并恢复ZO-1和Occludin蛋白的定位分布.由此说明,低聚壳聚糖硒可降低ZEN引起的IPEC-J2细胞AKP活性升高,上调ZEN引起的ZO-1、Occludin蛋白表达水平下降,并调节其定位分布.
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