【摘 要】
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目的应用酶消化法消化心室肌组织,培养心肌细胞,探索获得高存活率和高纯度心肌细胞的培养条件,为生理学和药理学研究提供细胞模型。方法胰蛋白酶和胶原酶Ⅰ联合消化新生大鼠
【机 构】
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桂林医学院生理学教研室,广西医科大学生理学教研室,桂林医学院组织学与胚胎学教研室,桂林医学院生药学教研室
【基金项目】
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广西自然科学基金(0728140)~~
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目的应用酶消化法消化心室肌组织,培养心肌细胞,探索获得高存活率和高纯度心肌细胞的培养条件,为生理学和药理学研究提供细胞模型。方法胰蛋白酶和胶原酶Ⅰ联合消化新生大鼠心室肌组织,控制消化时间和消化温度;用差速贴壁法和化学抑制法纯化心肌细胞进行体外培养。荧光显微镜观察心肌细胞形态学变化;流式细胞仪检测肌钙蛋白Ⅰ的表达;Fluo-3/AM进行细胞质内游离钙离子染色。结果培养的心肌细胞4 h后开始贴壁生长,24 h后有少数单个细胞出现自发性节律性搏动,之后连接成片,细胞簇同步收缩,细胞形态、结构完整;肌钙蛋白Ⅰ阳性率为91%;所有心肌细胞细胞质内钙离子染色阳性,荧光强度随细胞搏动呈强弱周期性变化。结论应用酶消化法可简单快捷地获得大量活力好、纯度高的心肌细胞,为心血管相关研究提供良好的实验模型。
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