【摘 要】
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目的：用于负链RNA病毒的重组技术称为反向遗传技术,其核心需要构建一个具有双向启动子的反向遗传通用载体,可以分别正向转录翻译病毒复制所需酶系和负向转录病毒负链RNA。为此
【机 构】
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汕头大学医学院微生物学与免疫学教研室
【基金项目】
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国家自然科学基金(30771988,30972766);广东省自然科学基金(8151503102000022,9451503102003499);高等学校博士学科点专项科研基金(20094402110004);广东高校优秀青年创新人才培育项目(LYM08056);农业微生物学国家重点实验室开放课题(AML200910)
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目的：用于负链RNA病毒的重组技术称为反向遗传技术,其核心需要构建一个具有双向启动子的反向遗传通用载体,可以分别正向转录翻译病毒复制所需酶系和负向转录病毒负链RNA。为此,构建负链RNA病毒反向遗传通用的载体。方法：为提高转染和表达效率,首先改造pcDNA3载体,通过酶切删除pcDNA3载体中非必需序列,在保留Amp抗性的前提下,通过酶切去除pcDNA3载体中非必需的Kan抗性表达盒与CMV启动子前区。利用长引物合成含有反向polI启动子与多克隆位点的基因片段。将合成后的片段酶切、补平粘端、连接,反向插入
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