【摘 要】
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目的 探讨miR-28-5p影响结肠癌细胞迁移活力的分子机制. 方法 选用结肠癌细胞(HCT116细胞)进行实验,实验分为两部分.第一部分实验:将HCT116细胞分为空白对照组(control组)和爱拉斯汀组(erastin组),control组不进行特殊处理,erastin组使用加有20μM erastin的培养基培养48 h.第二部分实验:将HCT116细胞分为拮抗剂阴性对照组(inhibi-tor-NC组)、miR-28-5p拮抗剂组(inhibitor组)、激动剂阴性对照组(mimics-NC组)
【机 构】
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广西医科大学第一附属医院康复医学科,广西南宁 530021
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目的 探讨miR-28-5p影响结肠癌细胞迁移活力的分子机制. 方法 选用结肠癌细胞(HCT116细胞)进行实验,实验分为两部分.第一部分实验:将HCT116细胞分为空白对照组(control组)和爱拉斯汀组(erastin组),control组不进行特殊处理,erastin组使用加有20μM erastin的培养基培养48 h.第二部分实验:将HCT116细胞分为拮抗剂阴性对照组(inhibi-tor-NC组)、miR-28-5p拮抗剂组(inhibitor组)、激动剂阴性对照组(mimics-NC组)、miR-28-5p激动剂组(mimics组),两组阴性对照分别转染拮抗剂阴性对照混合物和激动剂阴性对照混合物,miR-28-5p拮抗剂组转染miR-28-5p inhibitor以沉默miR-28-5p,miR-28-5p激动剂组转染miR-28-5p mimics以过表达miR-28-5p.用细胞划痕实验检测细胞迁移活力,实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测HCT116细胞中miR-28-5p的相对表达水平,蛋白质免疫印迹(WB)检测VAT1L蛋白的相对表达量.比较48 h后erastin组与control组miR-28-5p、VAT1L表达水平及两组细胞划痕迁移率和转染完成后各组细胞miR-28-5p、VAT1L表达水平. 结果 第一部分:与control组相比,erastin组miR-28-5p的相对表达量、VAT1L蛋白的相对表达量均有降低(均P<0.05);与control组相比,erastin组的细胞迁移率降低(P<0.05).第二部分:与inhibitor-NC组比较,miR-28-5p inhibitor组miR-28-5p的相对表达量降低(P<0.05);与mimics-NC组比较,miR-28-5p mimics组miR-28-5p的相对表达量增高(P<0.05).与inhibitor-NC组比较,miR-28-5p inhibitor组VAT1L蛋白的相对表达量升高(P<0.05);与mimics-NC组比较,miR-28-5p mimics组VAT1L蛋白的相对表达量降低(P<0.05). 结论 miR-28-5p可能通过抑制VAT1L的表达,以降低结肠癌细胞迁移活力.
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