【摘 要】
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目的:利用Red重组系统构建aroL和aroK缺失的大肠杆菌工程菌株。方法:本研究应用PCR扩增两翼与目的基因上下游同源的、含有氯霉素抗性基因片段,电击转化大肠杆菌BW25113。在阿
【机 构】
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清华大学自动化系清华信息科学与技术国家实验室生物信息学研究部; 军事医学科学院生物工程研究所 北京100084军事医学科学院生物工程研究所; 北京100071;
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目的:利用Red重组系统构建aroL和aroK缺失的大肠杆菌工程菌株。方法:本研究应用PCR扩增两翼与目的基因上下游同源的、含有氯霉素抗性基因片段,电击转化大肠杆菌BW25113。在阿拉伯糖诱导下,含有质粒pKD46的菌株DH5α表达λ噬菌体的3个重组蛋白,利用含同源臂的氯霉素抗性片段分别替换目的基因aroK和aroL,并进一步利用FTP位点专一性重组将氯霉素抗性基因删除。结果:成功地敲除了aroK和aroL基因。结论:莽草酸是一种具有极高价值的精细化工产品和医药中间体,具有广泛的医药、化工应用价值。莽草酸是莽草酸途径中的重要中间产物,它在莽草酸激酶(aroK和aroL)的作用下流向3-磷酸莽草酸,阻碍了莽草酸在大肠杆菌体内的堆积。敲除上述基因将为使用大肠杆菌发酵生产莽草酸奠定基础。
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