【摘 要】
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目的 探讨舒芬太尼(SF)对1-甲基-4-苯基-吡啶离子(MPP+)诱导的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞损伤的影响及其可能的分子机制。方法 采用流式细胞术检测MPP+对SH-SY5Y细胞凋亡的促
【机 构】
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同济大学附属东方医院神经内科; 上海长宁区妇幼保健院麻醉科;
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目的 探讨舒芬太尼(SF)对1-甲基-4-苯基-吡啶离子(MPP+)诱导的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞损伤的影响及其可能的分子机制。方法 采用流式细胞术检测MPP+对SH-SY5Y细胞凋亡的促进作用以及SF的抑制作用;采用比色法检测丙二醛(MDA)与谷胱甘肽(GSH)的含量;采用实时荧光定量聚合酶链反应(q RT-PCR)与蛋白免疫印迹法(Western blot)检测微小RNA-17-5p(miR-17-5p)、甲基化CpG结合蛋白(MECP2)的表达水平;检测抑制miR-17-5p表达或MECP2过表达后细胞中MDA、GSH水平及细胞凋亡率的变化;双荧光素酶报告基因检测miR-17-5p与MECP2的靶向作用关系;Western blot检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)的蛋白表达水平。结果 MPP+可明显促进SH-SY5Y细胞凋亡(P<0.05),Bax蛋白表达水平与MDA水平明显升高(P<0.05),GSH水平与Bcl-2蛋白表达水平明显减低(P<0.05);与MPP+组比较,不同浓度的SF处理后细胞凋亡明显减少(P<0.05),MECP2、Bcl-2表达水平与GSH水平明显升高(P<0.05),miR-17-5p、Bax表达水平与MDA水平明显降低(P<0.05),抑制miR-17-5p表达或MECP2过表达具有相似的作用;双荧光素酶报告实验证实miR-17-5p可靶向调控MECP2的表达与活性;miR-17-5p过表达可逆转SF对MPP+诱导的SH-SY5Y细胞损伤的保护作用。结论 舒芬太尼可通过调控miR-17-5p/MECP2表达,抑制细胞凋亡及增强其抗氧化能力,从而减轻MPP+诱导的SH-SY5Y细胞损伤。
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