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流感病毒聚合酶PB1—1蛋白的表达与单克隆抗体的制备

来源 :中国预防兽医学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户：qdmark

【摘 要】

：

为制备抗流感病毒（AIV）聚合酶PB1-1蛋白的单克隆抗体（MAb），本研究采用RT-PCR技术扩增H5N1亚型AIV聚合酶PB1部分基因片段，并将其克隆至载体pET-32a，转化至BL21细菌进行重组蛋白表达。

【作 者】

：

葛叶 邓国华 李雪平 陈化兰 

【机 构】

：

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室／兽医生物技术国家重点实验室

【出 处】

：

中国预防兽医学报

【发表日期】

：

2009年9期

【关键词】

：

PB1基因 原核表达 单克隆抗体 PB 1 gene  prokaryotic expression  monoclonal antibodies 

【基金项目】

：

十五科技攻关项目（2004BA519A54）

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为制备抗流感病毒（AIV）聚合酶PB1-1蛋白的单克隆抗体（MAb），本研究采用RT-PCR技术扩增H5N1亚型AIV聚合酶PB1部分基因片段，并将其克隆至载体pET-32a，转化至BL21细菌进行重组蛋白表达。靶蛋白经N-＋柱纯化后，western blot分析证实该重组蛋白与AIV阳性血清具有良好的免疫反应性。用纯化的PB1-1蛋白免疫BALB／c小鼠，取免疫小鼠的脾细胞与SP2／0小鼠骨髓瘤细胞融合，采用ELISA方法筛选阳性细胞克隆，连续多次克隆纯化后获得2株能稳定分泌抗H5亚型PB1 MAb的细

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