【摘 要】
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以低拷贝质粒pACYC184为载体,将hok/sok基因插入到载体BamHⅠ位点,构建重组质粒pACYC184-hok/sok稳定系统,同时构建hok/sok基因缺失突变重组质粒pACYC184-hok/sok(M)。通过对构建的重组菌进行连续传代和对不同代次的重组质粒进行SphⅠ酶切,分析hok/sok基因的引入对宿主细胞生长的影响。结果表明,重组质粒pACYC184-hok/sok在无抗生素筛
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目(30571374,30771603,31072136); 江苏省属高校自然科学重大基础研究项目(08KJA230002); 科技部转基因生物新品种培育重大专项(2009ZX08006-004B);
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以低拷贝质粒pACYC184为载体,将hok/sok基因插入到载体BamHⅠ位点,构建重组质粒pACYC184-hok/sok稳定系统,同时构建hok/sok基因缺失突变重组质粒pACYC184-hok/sok(M)。通过对构建的重组菌进行连续传代和对不同代次的重组质粒进行SphⅠ酶切,分析hok/sok基因的引入对宿主细胞生长的影响。结果表明,重组质粒pACYC184-hok/sok在无抗生素筛选压力下连续传代,传至第135代时质粒稳定率仍是100%,且传代前后的质粒SphⅠ酶切图谱没有发生变化,DNA序列测定表明,插入的hok/sok基因没有发生任何突变。突变重组质粒pACYC184-hok/sok(M)传代前后的质粒SphⅠ酶切结果虽没有发生变化,但其相应的重组菌传至第15代,质粒几乎完全丢失。生长曲线的测定结果表明,与含pACYC184重组菌生长曲线相似,pACYC184-hok/sok重组菌生长较快,而pACYC184-hok/sok(M)重组菌生长缓慢。以上结果表明,含hok/sok稳定系统,其稳定性明显高于无hok/sok稳定系统的质粒pACYC184以及突变质粒pACYC184-hok/sok(M)。重组质粒pACYC184-hok/sok具有良好的结构稳定性和分离稳定性。
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