人源化乙肝表面抗体重链克隆、表达及免疫学特性初步鉴定

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目的建立一种利用单细胞分选技术克隆人源化乙肝表面抗体重链的方法。方法从乙肝疫苗接种志愿者外周血中分选得到单个抗体分泌细胞,单细胞RT—PCR筛选20个单菌落,挑选其中有IgG保守区域的克隆全长,并将IgG(H)基因全长克隆到pEGFP—N1载体,转染COS-7细胞,取上清液进行Westernblotting验证,并采用Batty饱和法测定亲和力常数。结果筛选得到IgG(H)能与HBsAg结合,且Ka值达到2.39×10^9L/mol。结论利用单细胞分选克隆技术获得的抗体重链亲和力较高。
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