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[摘 要]目的 应用高效液相色谱法测定龟芪壮骨颗粒中二苯乙烯苷的含量。 方法 采用DiamonsilTM（钻石）C18（5μm，250mm×4.6mm），乙腈-0.2%磷酸溶液（23：77）为流动相，流速：1ml/min，检测波长为320nm。 结果 线性范围为0.0964～0.482μg，r=0.9998，平均回收率为98.00%，RDS=0.98%。 结论 该方法用于测定龟芪壮骨颗粒中二苯乙烯苷含量，简便、快速、准确。
[关键词]龟芪壮骨颗粒 二苯乙烯苷 测定
中图分类号：TH223 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2014）10-0346-01
龟芪壮骨颗粒是熟地黄、龟甲、杜仲等十八味中药组成。主要功能为补气补血，滋补肝肾，强筋壮骨。适用于腰膝酸软，气血不足等症。方中主要药物何首乌为蓼科植物何首乌的干燥块根。其有效成分之一为二苯乙烯苷。本实验采用高效液相色谱法[1，2]，测定龟芪壮骨颗粒中二苯乙烯苷的含量作为该制剂的质量控制指标，以便更好地控制该产品质量。
1 仪器与试药
日本岛津LC-10 AT高效液相色谱仪；SPD-10A紫外检测器；KQ—250型超声波处理器；2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-β-D-葡萄糖苷对照品（购于 中国 药品生物制品检定所，批号：0844-200003，HPLC面积归一化法，测定含量为99.61%）；龟芪壮骨颗粒由敦化市瑞隆药业有限责任公司提供；其它化学试剂均为国产，AR级。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：DiamonsilTM（鉆石）C18（5μm，250mm×4.6mm），乙腈-0.2%磷酸溶液（23：77）为流动相，流速：1ml/min，检测波长为320nm，理论塔板数按二苯乙烯占扑悖坏陀？000；柱温为室温。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.0241mg，作为对照品溶液。
2.3 方法
内容物2g，精密称定，置锥形瓶，加氯仿40ml，超声处理（功率250W，频率20kHz）15min，滤过，药渣挥干氯仿，连同滤纸移入具塞锥形瓶中，精密加入40%乙醇25ml，称定重量，超声处理（功率250W，频率20kHz）10min，放冷，用40%乙醇补足减失的重量，滤过，取续滤液，即得。
2.4 阴性对照溶液的制备
按处方量制备不含何首乌药材的阴性样品，按供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液。分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10μl，注入液相色谱仪中，按上述条件测定，结果表明，阴性对照溶液色谱图中与对照品位置处无干扰，此法可行。
2.5 线性关系考察
精密吸取二苯乙烯苷对照品溶液4、 8、 12、16、20μl，分别注入高效液相色谱仪中对照品HPLC色谱图供试品HPLC色谱图阴性对照HPLC色谱图图1？ 对照品HPLC色谱图、供试品HPLC色谱图、
阴性对照HPLC色谱图
进行分析，以对照品进样量（μg）为横坐标，以对照品的峰面积为纵坐标作图，得一条通过原点的直线，回归方程为：Y=1930369.2X+3605.115，r=0.9998，结果表明淫羊藿苷在0.0964～0.482μg间呈良好的线性关系。
2.6 精密度试验？ 精密吸取供试品溶液连续5次重复进样，测得相对偏差RSD=0.86%，测定结果见表1。
表1 精密度实验结果 （略）
2.7 稳定性试验
精密吸取供试品的溶液在 0、2、4、6h，分别进样，进行测定。结果二苯乙烯苷峰面积的RSD=0.245%，表明在6h内供试品溶液的淫羊藿苷含量稳定，测定结果见表2。
表2 供试品溶液稳定性试验结果放置时间（h） （略）
2.8 重现性试验
精密称取同一批号样品 5份，按供试品溶液的制备方法制备，依法进样分析，样品中二苯乙烯苷含量的RSD=1.49%，测定结果见表3。
表3 龟芪壮骨颗粒重现性试验结果表（略）
2.9 加样回收率试验
精密称取2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-o-β-D-葡萄糖苷对照品适量，加入到已测知2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-o-β-D-葡萄糖苷含量的龟芪壮骨颗粒样品中，置具塞锥形瓶中，精密加入40%乙醇100ml，按供试品溶液的制备方法制备，进样5μl，以外标法 计算 含量，计算回收率，结果见表4。
表4 加样回收率试验测定结果 （略）
2.10 样品的含量测定
按上述方法，制备供试品溶液，测定三批龟芪壮骨颗粒（5g/袋）中二苯乙烯苷的含量，结果见表5。
表5 龟芪壮骨颗粒中二苯乙烯苷含量测定结果 （略）
3 讨论
在对方中二苯乙烯苷测定色谱条件中流动相选择时曾采用乙腈-水（25：75）、乙腈-水（20：80）、乙腈-0.2%的磷酸水溶液（22：78）、乙腈-0.2%的磷酸水溶液（24：76）进行比较实验，结果采用乙腈—0.2%磷酸水（23：77）作为流动相，二苯乙烯苷与其他杂质峰能达到较好分离。
在供试品制备方法选择中，我们采用了冷浸12h、加热回流20min、超声处理10min三种方法进行比较试验，结果表明，超声处理和加热回流提取供试品测定其二苯乙烯苷含量相近，但加热回流提取方法供试品溶液中含有较多的杂质峰，故选用超声处理方法制备供试品。
本含量测定方法适用于测定龟芪壮骨颗粒中二苯乙烯苷的含量，具有方法简便、快速、准确等特点。
参考文献
[1] 高永堂，衣学龙，王兆华. HPLC法测定龟芪壮骨颗粒中二苯乙烯苷的含量，论文网，2011，05
[2] 冯伟红，李曼玲.HPLC法测定补肾腰痛颗粒中二苯乙烯苷的含量. 中国 实验方剂学杂志，2004，10（2）：4.
[3] 国家药典委员会编.中华人民共和国药典.一部.北京：化学 工业 出版社
[关键词]龟芪壮骨颗粒 二苯乙烯苷 测定
中图分类号：TH223 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2014）10-0346-01
龟芪壮骨颗粒是熟地黄、龟甲、杜仲等十八味中药组成。主要功能为补气补血，滋补肝肾，强筋壮骨。适用于腰膝酸软，气血不足等症。方中主要药物何首乌为蓼科植物何首乌的干燥块根。其有效成分之一为二苯乙烯苷。本实验采用高效液相色谱法[1，2]，测定龟芪壮骨颗粒中二苯乙烯苷的含量作为该制剂的质量控制指标，以便更好地控制该产品质量。
1 仪器与试药
日本岛津LC-10 AT高效液相色谱仪；SPD-10A紫外检测器；KQ—250型超声波处理器；2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-β-D-葡萄糖苷对照品（购于 中国 药品生物制品检定所，批号：0844-200003，HPLC面积归一化法，测定含量为99.61%）；龟芪壮骨颗粒由敦化市瑞隆药业有限责任公司提供；其它化学试剂均为国产，AR级。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：DiamonsilTM（鉆石）C18（5μm，250mm×4.6mm），乙腈-0.2%磷酸溶液（23：77）为流动相，流速：1ml/min，检测波长为320nm，理论塔板数按二苯乙烯占扑悖坏陀？000；柱温为室温。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.0241mg，作为对照品溶液。
2.3 方法
内容物2g，精密称定，置锥形瓶，加氯仿40ml，超声处理（功率250W，频率20kHz）15min，滤过，药渣挥干氯仿，连同滤纸移入具塞锥形瓶中，精密加入40%乙醇25ml，称定重量，超声处理（功率250W，频率20kHz）10min，放冷，用40%乙醇补足减失的重量，滤过，取续滤液，即得。
2.4 阴性对照溶液的制备
按处方量制备不含何首乌药材的阴性样品，按供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液。分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10μl，注入液相色谱仪中，按上述条件测定，结果表明，阴性对照溶液色谱图中与对照品位置处无干扰，此法可行。
2.5 线性关系考察
精密吸取二苯乙烯苷对照品溶液4、 8、 12、16、20μl，分别注入高效液相色谱仪中对照品HPLC色谱图供试品HPLC色谱图阴性对照HPLC色谱图图1？ 对照品HPLC色谱图、供试品HPLC色谱图、
阴性对照HPLC色谱图
进行分析，以对照品进样量（μg）为横坐标，以对照品的峰面积为纵坐标作图，得一条通过原点的直线，回归方程为：Y=1930369.2X+3605.115，r=0.9998，结果表明淫羊藿苷在0.0964～0.482μg间呈良好的线性关系。
2.6 精密度试验？ 精密吸取供试品溶液连续5次重复进样，测得相对偏差RSD=0.86%，测定结果见表1。
表1 精密度实验结果 （略）
2.7 稳定性试验
精密吸取供试品的溶液在 0、2、4、6h，分别进样，进行测定。结果二苯乙烯苷峰面积的RSD=0.245%，表明在6h内供试品溶液的淫羊藿苷含量稳定，测定结果见表2。
表2 供试品溶液稳定性试验结果放置时间（h） （略）
2.8 重现性试验
精密称取同一批号样品 5份，按供试品溶液的制备方法制备，依法进样分析，样品中二苯乙烯苷含量的RSD=1.49%，测定结果见表3。
表3 龟芪壮骨颗粒重现性试验结果表（略）
2.9 加样回收率试验
精密称取2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-o-β-D-葡萄糖苷对照品适量，加入到已测知2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-o-β-D-葡萄糖苷含量的龟芪壮骨颗粒样品中，置具塞锥形瓶中，精密加入40%乙醇100ml，按供试品溶液的制备方法制备，进样5μl，以外标法 计算 含量，计算回收率，结果见表4。
表4 加样回收率试验测定结果 （略）
2.10 样品的含量测定
按上述方法，制备供试品溶液，测定三批龟芪壮骨颗粒（5g/袋）中二苯乙烯苷的含量，结果见表5。
表5 龟芪壮骨颗粒中二苯乙烯苷含量测定结果 （略）
3 讨论
在对方中二苯乙烯苷测定色谱条件中流动相选择时曾采用乙腈-水（25：75）、乙腈-水（20：80）、乙腈-0.2%的磷酸水溶液（22：78）、乙腈-0.2%的磷酸水溶液（24：76）进行比较实验，结果采用乙腈—0.2%磷酸水（23：77）作为流动相，二苯乙烯苷与其他杂质峰能达到较好分离。
在供试品制备方法选择中，我们采用了冷浸12h、加热回流20min、超声处理10min三种方法进行比较试验，结果表明，超声处理和加热回流提取供试品测定其二苯乙烯苷含量相近，但加热回流提取方法供试品溶液中含有较多的杂质峰，故选用超声处理方法制备供试品。
本含量测定方法适用于测定龟芪壮骨颗粒中二苯乙烯苷的含量，具有方法简便、快速、准确等特点。
参考文献
[1] 高永堂，衣学龙，王兆华. HPLC法测定龟芪壮骨颗粒中二苯乙烯苷的含量，论文网，2011，05
[2] 冯伟红，李曼玲.HPLC法测定补肾腰痛颗粒中二苯乙烯苷的含量. 中国 实验方剂学杂志，2004，10（2）：4.
[3] 国家药典委员会编.中华人民共和国药典.一部.北京：化学 工业 出版社