【摘 要】
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目的 对VP3进行克隆和测序后,在杆状病毒系统中表达获得重组蛋白,为AEV的分子诊断以及更深一层次的分子和基因工程研究打下基础.方法 利用RT-PCR技术,从AEV VR株感染的SPF鸡
【机 构】
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哈尔滨医科大学实验动物学部,哈尔滨,150086东北农业大学,哈尔滨,150030;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,哈尔滨,150001;
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目的 对VP3进行克隆和测序后,在杆状病毒系统中表达获得重组蛋白,为AEV的分子诊断以及更深一层次的分子和基因工程研究打下基础.方法 利用RT-PCR技术,从AEV VR株感染的SPF鸡胚脑及内脏器官组织中提取病毒RNA并扩增出VP3目的 基因,而后克隆到pMD18-T载体中,鉴定后进行序列测定;应用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统,将VP3基因定向克隆到pFastBacHTa donor质粒中,经转座反应,筛选到VP3-Bacmid重组子,转染sf9昆虫细胞并盲传三代,提取DNA应用PCR方法鉴定证实获得含VP3的重组病毒,Western blot鉴定VP3在杆状病毒系统中得以表达.结果 AEV VR株VP3基因全长735 bp,共编码245个氨基酸,与AEV-1143标准毒株相应片段的核苷酸和氨基酸同源性分别为93%和97%;并将其与其它小RNA病毒进行了比较;Western blot鉴定结果,重组蛋白大小约27 ku.结论 本研究通过RT-PCR技术首次从体外成功扩增AEV Van-Roekel株VP3蛋白基因,并对其进行克隆、测序;应用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统成功地表达了VP3基因并获得了具有良好免疫活性的重组蛋白.
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