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摘要：目的：分析抗核抗体（ANA）及抗核抗体谱（ENA）联合检测在自身免疫性疾病（AID）筛查中的临床应用。方法：选择我院2012年12月至2013年12月收治的AID患者120例，回顾性分析其临床资料及ANA、ENA检测的结果。结果：ANA在各种AID中均有一定的阳性检出率，其在类风湿关节炎（RA）、系统性红斑狼疮（SLE）、干燥综合征（SS）、系统性硬皮病（PSS）、混合性结缔组织病（DMCT）、肌炎/皮肌炎（PM/DM）的检出阳性率分别为58.3%、96.3%、90.0%、75.0%、73.3%、66.7%。ENA中的各种抗体对不同AID特异性和敏感性不同，其中对SLE的敏感度最高，为62.9%。结论：开展 ANA 与ENA抗体联合检测在AID疾病的筛查中具有重要意义。
关键词：自身免疫疾病；ANA；ENA；回顾性分析
自身免疫性疾病（autoimmune diseases，AID）是指机体免疫效应细胞或分子对自身组织或细胞产生病理性免疫应答反应，最终导致组织损伤或功能障碍的疾病 [1，2]，其发病原因复杂，临床表现多种多样，常见的有类风湿性关节炎（RA）、系统性红斑狼疮（SLE）、干燥综合征（SS）、系统性硬皮病（PSS）、混合性结缔组织病（MCTD）、肌炎/皮肌炎（PM/DM）等，严重危害人们的健康。正常人的血清中含有对抗自身成分的抗体，由于其效价很低，不会对自身成分产生免疫应答，但当机体发生AID时，其血清中会产生高效的自身抗体[3]。因此，自身抗体检测对各种AID的筛查和诊断具有重要意义。本研究针对我院 2012年12月～2013年12月在门诊或住院确诊为AID 的患者120例，将其检测的自身抗体ANE、ENA结果进行回顾性分析，分析自身抗体检测在本院的临床应用情况，现报道如下。
1资料与方法
1.1 标本来源
选取我院2012年12月-2013年12月门诊或住院确诊为AID的患者120例，男性42例，女性78例，年龄 13～86 岁，平均 50岁。其病种分布为类风湿关节炎24例，系统性红斑狼疮54例，干燥综合征20例，系统性硬皮病4例，混合性结缔组织病 15例，肌炎/皮肌炎3例，各病种符合美国风湿病学会（ACR）诊断标准。另取门诊体检的20名健康体检者作为对照组。
1.2 方法
1.2.1 标本处理
所有病例均采集非抗凝静脉血3ml，离心分离血清，3000 r/min离心5 min，取上清，检测 ANA 与 ENA。
1.2.2 检测方法
采用间接免疫荧光法（IIF）检测ANE（标本用PBS缓冲液1：100稀释），然后将其加入抗原基质片中使之反应30min，随后取出清洗3次（5min/次）；之后加入荧光标记的二抗，避光情况下室温温育30min，取出后洗涤3次（5min/次），加甘油封片，随后荧光显微镜观察结果，抗体滴度﹤1：100为阴性，滴度≥1：100为阳性。ENA检测采用免疫印迹法（标本用PBS缓冲液1：100稀释），检测项目包括：抗nRNP/Sm、抗Sm、抗SS-A、抗SS-B、抗Scl-70、抗Jo-1、ds-DNA。所有试剂均购自德国欧蒙实验免疫制品有限公司，实验操作严格按照说明书进行。
1.3统计学处理
采用SPSS 17.0 软件进行统计学处理，实验数据均采用2检验，P<0.05为差异具有统计学意义。
2结 果
2.1 ANA、ENA在各病种中的检测结果
120例AID患者中ANA阳性率为85.0%（102/120），ENA检测阳性率为42.5%（51/120），其中ANE检测阳性率在SLE、SS、PSS中较高，分别为96.3%、90.0%、75.0%；ENA阳性率在SLE，PSS的检出率较高，分别为62.9%，50%，见表1。
表1 ANA、ENA检测在各病种检測中的阳性率[n（%）]
项目 RA
（n=24） SLE
（n=54） SS
（n=20） PSS
（n=4） MCTD
（n=15） PM/DM
（n=3） 对照组
（n=20）
ANE 14（58.3）* 52（96.3）* 18（90.0）* 3（75.0）* 11（73.3）* 2（66.7）* 0（0）
ENA 3（12.5）* 34（62.9）* 9（45.0）* 2（50.0）* 2（13.3）* 1（33.3）* 0（0）
注：与对照组比较，*p<0.01。
2.2 120例AID患者各病种ANA荧光模式分析
ANA对AID各病种均有一定的阳性率，其检测析结果见表2。
表2 各病种ANA阳性荧光模式分析[n（%）]
病种 n 颗粒型 均质型 核仁型 胞浆颗粒型 着丝点型 混合型
RA 24 8（33.3）* 12（50.0* 0（0） 1（4.1）* 0（0） 3（12.5）*
SLE 54 20（37.0）* 21（38.9* 0（0） 6（11.1）* 0（0） 7（12.9）*
SS 20 12（60.0）* 7（35.0* 0（0） 1（5.0）* 0（0） 0（0）
PSS 4 0（0） 0（0） 3（75.0）* 0（0） 1（25.0）* 0（0）
MCTD 15 8（53.3）* 5（33.3）* 0（0） 0（0） 0（0） 2（13.3）*
PM/DM 3 0（0） 2（66.7）* 1（33.3）* 0（0） 0（0） 0（0） 对照组 20 0（0） 0（0） 0（0） 0（0） 0（0） 0（0）
注：与对照组比较，*p<0.01。
2.3 120例AID患者各病种抗ENA抗体谱检测
不同的AID病种对各抗体的敏感性不同，具体结果见表3。
表3 120例AID患者血清ENA检测结果[n（%）]
项目 RA
（n=24） SLE
（n=54） SS
（n=20） PSS
（n=4） MCTD
（n=15） PM/DM
（n=3） 对照组
（n=20）
抗nRNP/Sm 7（29.2）* 14（25.9）* 0（0） 0（0） 11（73.3）* 0（0） 0（0）
抗Sm 11（45.8）* 26（48.1）* 0（0） 0（0） 0（0） 0（0） 0（0）
抗SS-A 10（41.7）* 18（33.3）* 20（100.0）* 0（0） 12（80.0）* 0（0） 0（0）
抗SS-B 4（16.7）* 12（22.2）* 18（90.0）* 0（0） 9（60.0）* 0（0） 0（0）
抗Scl-70 0（0）* 0（0） 0（0）* 4（100.0）* 0（0） 0（0） 0（0）
抗Jo-1 1（4.2）* 0（0） 0（0）* 0（0） 0（0） 3（100.0）* 0（0）
ds-DNA 0（0）* 46（85.2）* 0（0）* 0（0） 0（0） 0（0） 0（0）
注：與对照组比较，*p<0.01。
3讨 论
近年来，随着医学诊断技术的不断提高，AID的发病率呈上升趋势，其发病率约占世界人口的3%～5%[4]。AID的诊断标准是在体内检测出某病特异性或与之相关的自身抗体。自身抗体指由于各种原因造成机体产生针对自身组织、器官、细胞等产生的抗体，可与自身组分的抗原发生反应，最终导致机体发生一系列生理、病理改变。其中ANA指各种真核细胞核成分抗体的总称，是一种普遍存在的自身抗体，可与不同来源的靶抗原起反应，敏感性较高，但特异性不强，可用于多种AID的筛查[5]。本实验结果显示，各种不同病种的AID患者均有一定的ANA阳性检出率，荧光模式主要以颗粒型和均质型为主，其中SLE、SS、PSS中的阳性率较高，分别为96.3%、90.0%、75.0%，其次在MCTD、PM/DM、RA中的阳性率分别为73.3%，66.7%、RA58.3%。与其它报告的研究结果类似[6]。ENA是可提取性核抗原抗体的总称[7]，常用的ENA包括抗nRNP/Sm、Sm、SS-A、SS-B、Scl-70、Jo-1、ds-DNA7种类型。研究证明，抗ds-DNA是SLE标志性指标，特异性较高，一般仅在SLE患者中发现，健康人群和其它疾病中不会出现，故可作为SLE的标记抗体[8]。抗nRNP/Sm、Sm、SS-A，SS-B也可作为诊断SLE的辅助指标，本研究中其阳性率分别为25.9%、48.1%、33.1%。此外，抗Scl-70为PSS的标志性抗体，特异性极高，本研究中其特异性为100%。抗SS-A可作为SS的特异性抗体，结果显示，其在SS的阳性率为100%。
综上所述，ANA可用于AID初步筛选实验，可与ENA联合检测来评估AID。其中ANA与抗ds-DNA和Sm结合可作为SLE的确诊实验。抗Scl-70可作为PSS的特异性抗体。SSA、SSB对SS的筛查具有重要意义。对ANA、ENA联合检测，对AID筛查、诊断鉴别有着重要的价值。
参考文献：
[1]周厚清，董敏，马路.NA、抗ds-DNA和ENA多肽抗体与自身免疫性疾病的关系[J].中国卫生检验杂志，2008，18（12）：2675-2676.
[2]张晓洁，崔毓桂，陈子庆，等.8种自身抗体联合检测对自身免疫性疾病诊断的临床意义[J].江苏医药，2010，36（20）：2373-2375.
[3]魏方.抗核抗体与抗 ENA 抗体的相关性分析[J].实验与检验医学，2009，27（1）：61-62.
[4]谢璟，小莲，李健.106例自身免疫性疾病患者的血清抗核抗体和自身抗体检测结果分析[J].中国实验诊断学，2014，18（5）：800-801.
[5]黄雪梅，蒲泽晏，刘芳久. ANA、ENA、ds-DNA 抗体在自身免疫性疾病中的敏感性及相关性分析[J].西部医学，2010，22（3）：534-537.
[6]王国丽，王有为，肖莎丽，等.614例系统性红斑狼疮自身抗体检测结果分析[J].中国中西医结合皮肤性病学杂志，2005，3（1）：46.
[7]刘璟，游进.自身免疫性疾病患者169例 ANA 与 ENA 自身抗体检测分析[J].现代医药卫生，2013，29（16）：2475-2476.
[8]陈滢，张迎梅，陆俊忠，等.自身抗体联合检测在自身免疫性疾病诊断中的应用价值[J].检验医学与临床，2008，5（24）：1494-1496.
关键词：自身免疫疾病；ANA；ENA；回顾性分析
自身免疫性疾病（autoimmune diseases，AID）是指机体免疫效应细胞或分子对自身组织或细胞产生病理性免疫应答反应，最终导致组织损伤或功能障碍的疾病 [1，2]，其发病原因复杂，临床表现多种多样，常见的有类风湿性关节炎（RA）、系统性红斑狼疮（SLE）、干燥综合征（SS）、系统性硬皮病（PSS）、混合性结缔组织病（MCTD）、肌炎/皮肌炎（PM/DM）等，严重危害人们的健康。正常人的血清中含有对抗自身成分的抗体，由于其效价很低，不会对自身成分产生免疫应答，但当机体发生AID时，其血清中会产生高效的自身抗体[3]。因此，自身抗体检测对各种AID的筛查和诊断具有重要意义。本研究针对我院 2012年12月～2013年12月在门诊或住院确诊为AID 的患者120例，将其检测的自身抗体ANE、ENA结果进行回顾性分析，分析自身抗体检测在本院的临床应用情况，现报道如下。
1资料与方法
1.1 标本来源
选取我院2012年12月-2013年12月门诊或住院确诊为AID的患者120例，男性42例，女性78例，年龄 13～86 岁，平均 50岁。其病种分布为类风湿关节炎24例，系统性红斑狼疮54例，干燥综合征20例，系统性硬皮病4例，混合性结缔组织病 15例，肌炎/皮肌炎3例，各病种符合美国风湿病学会（ACR）诊断标准。另取门诊体检的20名健康体检者作为对照组。
1.2 方法
1.2.1 标本处理
所有病例均采集非抗凝静脉血3ml，离心分离血清，3000 r/min离心5 min，取上清，检测 ANA 与 ENA。
1.2.2 检测方法
采用间接免疫荧光法（IIF）检测ANE（标本用PBS缓冲液1：100稀释），然后将其加入抗原基质片中使之反应30min，随后取出清洗3次（5min/次）；之后加入荧光标记的二抗，避光情况下室温温育30min，取出后洗涤3次（5min/次），加甘油封片，随后荧光显微镜观察结果，抗体滴度﹤1：100为阴性，滴度≥1：100为阳性。ENA检测采用免疫印迹法（标本用PBS缓冲液1：100稀释），检测项目包括：抗nRNP/Sm、抗Sm、抗SS-A、抗SS-B、抗Scl-70、抗Jo-1、ds-DNA。所有试剂均购自德国欧蒙实验免疫制品有限公司，实验操作严格按照说明书进行。
1.3统计学处理
采用SPSS 17.0 软件进行统计学处理，实验数据均采用2检验，P<0.05为差异具有统计学意义。
2结 果
2.1 ANA、ENA在各病种中的检测结果
120例AID患者中ANA阳性率为85.0%（102/120），ENA检测阳性率为42.5%（51/120），其中ANE检测阳性率在SLE、SS、PSS中较高，分别为96.3%、90.0%、75.0%；ENA阳性率在SLE，PSS的检出率较高，分别为62.9%，50%，见表1。
表1 ANA、ENA检测在各病种检測中的阳性率[n（%）]
项目 RA
（n=24） SLE
（n=54） SS
（n=20） PSS
（n=4） MCTD
（n=15） PM/DM
（n=3） 对照组
（n=20）
ANE 14（58.3）* 52（96.3）* 18（90.0）* 3（75.0）* 11（73.3）* 2（66.7）* 0（0）
ENA 3（12.5）* 34（62.9）* 9（45.0）* 2（50.0）* 2（13.3）* 1（33.3）* 0（0）
注：与对照组比较，*p<0.01。
2.2 120例AID患者各病种ANA荧光模式分析
ANA对AID各病种均有一定的阳性率，其检测析结果见表2。
表2 各病种ANA阳性荧光模式分析[n（%）]
病种 n 颗粒型 均质型 核仁型 胞浆颗粒型 着丝点型 混合型
RA 24 8（33.3）* 12（50.0* 0（0） 1（4.1）* 0（0） 3（12.5）*
SLE 54 20（37.0）* 21（38.9* 0（0） 6（11.1）* 0（0） 7（12.9）*
SS 20 12（60.0）* 7（35.0* 0（0） 1（5.0）* 0（0） 0（0）
PSS 4 0（0） 0（0） 3（75.0）* 0（0） 1（25.0）* 0（0）
MCTD 15 8（53.3）* 5（33.3）* 0（0） 0（0） 0（0） 2（13.3）*
PM/DM 3 0（0） 2（66.7）* 1（33.3）* 0（0） 0（0） 0（0） 对照组 20 0（0） 0（0） 0（0） 0（0） 0（0） 0（0）
注：与对照组比较，*p<0.01。
2.3 120例AID患者各病种抗ENA抗体谱检测
不同的AID病种对各抗体的敏感性不同，具体结果见表3。
表3 120例AID患者血清ENA检测结果[n（%）]
项目 RA
（n=24） SLE
（n=54） SS
（n=20） PSS
（n=4） MCTD
（n=15） PM/DM
（n=3） 对照组
（n=20）
抗nRNP/Sm 7（29.2）* 14（25.9）* 0（0） 0（0） 11（73.3）* 0（0） 0（0）
抗Sm 11（45.8）* 26（48.1）* 0（0） 0（0） 0（0） 0（0） 0（0）
抗SS-A 10（41.7）* 18（33.3）* 20（100.0）* 0（0） 12（80.0）* 0（0） 0（0）
抗SS-B 4（16.7）* 12（22.2）* 18（90.0）* 0（0） 9（60.0）* 0（0） 0（0）
抗Scl-70 0（0）* 0（0） 0（0）* 4（100.0）* 0（0） 0（0） 0（0）
抗Jo-1 1（4.2）* 0（0） 0（0）* 0（0） 0（0） 3（100.0）* 0（0）
ds-DNA 0（0）* 46（85.2）* 0（0）* 0（0） 0（0） 0（0） 0（0）
注：與对照组比较，*p<0.01。
3讨 论
近年来，随着医学诊断技术的不断提高，AID的发病率呈上升趋势，其发病率约占世界人口的3%～5%[4]。AID的诊断标准是在体内检测出某病特异性或与之相关的自身抗体。自身抗体指由于各种原因造成机体产生针对自身组织、器官、细胞等产生的抗体，可与自身组分的抗原发生反应，最终导致机体发生一系列生理、病理改变。其中ANA指各种真核细胞核成分抗体的总称，是一种普遍存在的自身抗体，可与不同来源的靶抗原起反应，敏感性较高，但特异性不强，可用于多种AID的筛查[5]。本实验结果显示，各种不同病种的AID患者均有一定的ANA阳性检出率，荧光模式主要以颗粒型和均质型为主，其中SLE、SS、PSS中的阳性率较高，分别为96.3%、90.0%、75.0%，其次在MCTD、PM/DM、RA中的阳性率分别为73.3%，66.7%、RA58.3%。与其它报告的研究结果类似[6]。ENA是可提取性核抗原抗体的总称[7]，常用的ENA包括抗nRNP/Sm、Sm、SS-A、SS-B、Scl-70、Jo-1、ds-DNA7种类型。研究证明，抗ds-DNA是SLE标志性指标，特异性较高，一般仅在SLE患者中发现，健康人群和其它疾病中不会出现，故可作为SLE的标记抗体[8]。抗nRNP/Sm、Sm、SS-A，SS-B也可作为诊断SLE的辅助指标，本研究中其阳性率分别为25.9%、48.1%、33.1%。此外，抗Scl-70为PSS的标志性抗体，特异性极高，本研究中其特异性为100%。抗SS-A可作为SS的特异性抗体，结果显示，其在SS的阳性率为100%。
综上所述，ANA可用于AID初步筛选实验，可与ENA联合检测来评估AID。其中ANA与抗ds-DNA和Sm结合可作为SLE的确诊实验。抗Scl-70可作为PSS的特异性抗体。SSA、SSB对SS的筛查具有重要意义。对ANA、ENA联合检测，对AID筛查、诊断鉴别有着重要的价值。
参考文献：
[1]周厚清，董敏，马路.NA、抗ds-DNA和ENA多肽抗体与自身免疫性疾病的关系[J].中国卫生检验杂志，2008，18（12）：2675-2676.
[2]张晓洁，崔毓桂，陈子庆，等.8种自身抗体联合检测对自身免疫性疾病诊断的临床意义[J].江苏医药，2010，36（20）：2373-2375.
[3]魏方.抗核抗体与抗 ENA 抗体的相关性分析[J].实验与检验医学，2009，27（1）：61-62.
[4]谢璟，小莲，李健.106例自身免疫性疾病患者的血清抗核抗体和自身抗体检测结果分析[J].中国实验诊断学，2014，18（5）：800-801.
[5]黄雪梅，蒲泽晏，刘芳久. ANA、ENA、ds-DNA 抗体在自身免疫性疾病中的敏感性及相关性分析[J].西部医学，2010，22（3）：534-537.
[6]王国丽，王有为，肖莎丽，等.614例系统性红斑狼疮自身抗体检测结果分析[J].中国中西医结合皮肤性病学杂志，2005，3（1）：46.
[7]刘璟，游进.自身免疫性疾病患者169例 ANA 与 ENA 自身抗体检测分析[J].现代医药卫生，2013，29（16）：2475-2476.
[8]陈滢，张迎梅，陆俊忠，等.自身抗体联合检测在自身免疫性疾病诊断中的应用价值[J].检验医学与临床，2008，5（24）：1494-1496.