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目的 比较在蛋白质组学中使用的20 cm SDS-PAGE和传统的8 cm SDS-PAGE在细胞膜钙ATP酶(PMCA)同工异构体表观相对分子质量测量的差异.方法 人晶状体上皮细胞(HLE B-3细胞)经培养至90%融合后,收集其膜蛋白.部分样品行20 cm SDS-PAGE,条件为16 mA/gel,然后改为24 mA/gel,共4～5 h.另一部分样品行8 cm SDS-PAGE,条件为200V 45 min.在同一胶上同时电泳已知相对分子质量的蛋白质标记物.分离厚的蛋白转移到PVDF膜上,用针对细胞膜钙ATP酶(PMCA)同工异构体PMCA1、PMCA2和PMCA4的特舁性抗体进行Western印迹检测.通过电泳移行距离与对数相对分子质量的线性关系计算各个同工异构体的表观相对分子质量.结果 从电泳条带的形态上看,8 cm胶中蛋白条带较细而浓集,而20 cm胶中较宽而扩散.在8 cm胶208 000和126 000条带之间的距离为6.1 mm,而在20 cm胶此距离为32.8 mm.在8 cm胶126 000和97 000条带之间的距离为5.2 mm,而在20 cm胶为20.2mm.20 cm胶中各蛋白条带的移行距离较8 cm胶增加.但是在8 cm胶中蛋白质条带的浓集性较好.在8 cm胶中PMCA 1、2、4的表观相对分子质量分别为153 800、153 500和152 900;在20 cm胶中,则分别为153 1130、125 500和147 400.结论 首次证实20cm和8cm SDS-PAGE均能成功榆测HLE B-3细胞中PMCA 1、2、4的存在,但是检测出的表观相对分子质量有所不同.PMCA 1、2、4的相对分子质量在8 cm胶中分别为153 800,153 500和152 900,而在20 cm胶中分别为153 100,125 500和147 400.PMCA2很可能在20 cm胶长时间的电泳过程中发生了蛋白水解现象.