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摘 要：头孢氨苄为半合成头孢菌素类广谱抗生素。头孢氨苄的作用机制是抑制细菌细胞壁的合成。方法：采用安捷伦 C18色谱柱（218 mm×4.6mm，5μm），水-乙腈-3.86%醋酸钠溶液-醋酸（800∶180∶20∶0.01），检测波长为254nm，流速为1.0ml/min，柱温为30℃。结论：本法简便、准确，可用于头孢氨苄干混悬剂中头孢氨苄的含量测定。
关键词：头孢氨苄干混悬剂；含量；测定
头孢氨苄化学名为（6R，7R）-3-甲基-7-[（R）-2-氨基-2-苯乙酰氨基]-8-氧代-5-硫杂-1-氮杂双环[4.2.0]辛-2-烯-2-甲酸-水合物。头孢氨苄为半合成头孢菌素类广谱抗生素。头孢氨苄抗菌谱与头孢噻吩相似，除肠球菌属、甲氧西林耐药葡萄球菌外，多数革兰阳性球菌对本品敏感。
头孢氨苄干混悬剂适用于敏感细菌所致的轻、中度急性扁桃体炎、咽峡炎、中耳炎、鼻窦炎、支气管炎、肺炎等呼吸道感染、尿路感染和皮肤软组织感染等。头孢氨苄的测定方法较多[1-5]。本实验采用高效液相色谱法对头孢氨苄干混悬剂中的头孢氨苄的进行了含量测定。
1仪器与试药
1.1仪器：液相柱温箱（滕州市滕海分析仪器有限公司）；TH-UP实验室专用高纯水机（滕州市滕海分析仪器有限公司）；德安特分析天平 0.1mg（上海升徽电子有限公司）；精密电子天平（厦门德量检测仪器有限公司）；HS11-1电热恒温水浴锅（上海昨非实验室设备有限公司）；Waters2695高效液相色谱仪（北京京科瑞达科技有限公司）；721可见光分光光度计（四川赛恩思仪器有限公司）；SB25-12D超声波清洗机（宁波新芝生物科技股份有限公司）。
1.2色谱柱：安捷伦 C18色谱柱（218 mm×4.6mm，5μm）。
1.3对照品：青霉素 购自中国药品生物制品检定所。
1.4试剂：甲醇（青岛雅各化学试剂销售有限公司）、三乙胺（济南汇丰达化工有限公司）、乙腈（青岛雅各化学试剂销售有限公司）、磷酸二氢钠（济南汇丰达化工有限公司）、冰醋酸（青岛雅各化学试剂销售有限公司）、醋酸钠（青岛雅各化学试剂销售有限公司）、醋酸（青岛雅各化学试剂销售有限公司）、磷酸（济南汇丰达化工有限公司）。甲基纤维素（西安泰华医药科技有限公司）、枸橼酸（西安泰华医药科技有限公司）、枸橼酸钠（西安泰华医药科技有限公司）、柠檬黄（西安泰华医药科技有限公司）、香精（湖北武汉新河生物工程有限责任公司）、蔗糖（湖北武汉新河生物工程有限责任公司）。
1.5试药：头孢氨苄干混悬剂
2测定方法确定
2.1色谱条件
頭孢氨苄水溶液在pH8.5以下较稳定。依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下。流动相：水-乙腈-3.86%醋酸钠溶液-醋酸（800∶180∶20∶0.01），检测波长：254nm，流速：1.0m·min-1。柱温：30℃。理论板数按头孢氨苄峰计算应不得低于2000。
2.2对照品溶液的制备
精密称取头孢氨苄对照品适量，置容量瓶中，加流动相制成每1mL含20μg的溶液，即得。
2.3供试品溶液的制备
取头孢氨苄干混悬剂适量，研细，精密称取，加5毫升流动相，超声2分钟，过滤，滤液转移至10毫升容量瓶内，即得。
2.4专属性试验
取甲基纤维素、枸橼酸、枸橼酸钠、柠檬黄、香精、蔗糖等制成阴性样品，依上述方法测定，结果在头孢氨苄出峰处阴性液无色谱峰，结果阴性试验没有干扰，表明本方法专属性良好。
2.5精密度试验
精密称取头孢氨苄对照品适量，加流动相使溶解，制成浓度为20μg·mL-1的供试品溶液。照上述色谱条件，精密吸取10μl，连续进样6次，记录峰面积。结果，RSD=0.89%，表明本方法精密度良好。
2.6对照品的线性考察
精密称取头孢氨苄对照品20mg，置250ml容量瓶中，加入流动相溶液使溶解并稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取0.5、1.5、2.5、3.0、3.5、4.5mL，置于5mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。分别精密上述溶液吸取10μL，注人液相色谱仪，依照2.1项下的色谱条件测定，记录色谱峰。以峰面积（Y）为纵坐标，对照品进样量（X）为横坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。结果表明，头孢氨苄在8～80μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。
2.7准确度试验
精密称取已知含量的样品6份，分别加入一定量的头孢氨苄对照品，上述方法进行测定，计算回收率，平均回收率为99.1%，RSD=0.99%。结果表明此方法的回收率良好。
3结论
头孢氨苄干混悬剂适用于流行性感冒，气肿疽、恶性水肿、坏死杆菌病、等所引起的败血性高热（41～43℃）或持续低温（37℃以下）等，是临床常用药物。本实验分别考察磷酸盐缓冲液（pH4.5）-甲醇-乙腈（80：10：10），甲醇-0.2%磷酸溶液（40：60），甲醇-水（67：33），乙腈-0.02 mol/L磷酸二氢钾溶液 （pH 6.5）（36：64），水-乙腈-3.86%醋酸钠溶液-醋酸（800∶180∶20∶0.01）不同比例的流动相，结果以水-乙腈-3.86%醋酸钠溶液-醋酸（800∶180∶20∶0.01）为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用水-乙腈-3.86%醋酸钠溶液-醋酸（800∶180∶20∶0.01）为流动相。本实验表明此方法可用于头孢氨苄干混悬剂中头孢氨苄的含量测定。头孢氨苄干混悬剂中头孢氨苄的含量为标示量的95-105%。
参考文献：
[1]胡佳丽；于东升；刘小雷；云彩麟；李莉；刘彩虹；张帆；陈艳；邹明强；荧光免疫层析法快速测定牛奶中头孢氨苄残留量[J]；中国食品卫生杂志；2014年04期
[2]卞素敏；扈洪波；邢仕歌；张悦；熊齐荣；钟强；金涌；储晓刚；ELISA法检测牛奶中头孢氨苄残留[J]；食品科学；2013年20期
[3]张健；王长远；刘琦；郭鑫金；苍健；孟强；Taiichi Kaku；刘克辛；JBP485与头孢氨苄相互作用的药动学研究[A]；第九届全国药物和化学异物代谢学术会议论文集[C]；2009年
[4]姚晔；余沐洋；邓宁；何建波；；高效毛细管电泳分离检测5种β-内酰胺类抗生素[A]；中国化学会第27届学术年会第09分会场摘要集[C]；2010年
[5]郭玄；于雪荣；李士阔；张秀真；沈玉华；王阳；离子液体[BMIM]BF_4的微波合成及其在萃取头孢氨苄中的应用[J]；化学研究与应用；2010年12期
关键词：头孢氨苄干混悬剂；含量；测定
头孢氨苄化学名为（6R，7R）-3-甲基-7-[（R）-2-氨基-2-苯乙酰氨基]-8-氧代-5-硫杂-1-氮杂双环[4.2.0]辛-2-烯-2-甲酸-水合物。头孢氨苄为半合成头孢菌素类广谱抗生素。头孢氨苄抗菌谱与头孢噻吩相似，除肠球菌属、甲氧西林耐药葡萄球菌外，多数革兰阳性球菌对本品敏感。
头孢氨苄干混悬剂适用于敏感细菌所致的轻、中度急性扁桃体炎、咽峡炎、中耳炎、鼻窦炎、支气管炎、肺炎等呼吸道感染、尿路感染和皮肤软组织感染等。头孢氨苄的测定方法较多[1-5]。本实验采用高效液相色谱法对头孢氨苄干混悬剂中的头孢氨苄的进行了含量测定。
1仪器与试药
1.1仪器：液相柱温箱（滕州市滕海分析仪器有限公司）；TH-UP实验室专用高纯水机（滕州市滕海分析仪器有限公司）；德安特分析天平 0.1mg（上海升徽电子有限公司）；精密电子天平（厦门德量检测仪器有限公司）；HS11-1电热恒温水浴锅（上海昨非实验室设备有限公司）；Waters2695高效液相色谱仪（北京京科瑞达科技有限公司）；721可见光分光光度计（四川赛恩思仪器有限公司）；SB25-12D超声波清洗机（宁波新芝生物科技股份有限公司）。
1.2色谱柱：安捷伦 C18色谱柱（218 mm×4.6mm，5μm）。
1.3对照品：青霉素 购自中国药品生物制品检定所。
1.4试剂：甲醇（青岛雅各化学试剂销售有限公司）、三乙胺（济南汇丰达化工有限公司）、乙腈（青岛雅各化学试剂销售有限公司）、磷酸二氢钠（济南汇丰达化工有限公司）、冰醋酸（青岛雅各化学试剂销售有限公司）、醋酸钠（青岛雅各化学试剂销售有限公司）、醋酸（青岛雅各化学试剂销售有限公司）、磷酸（济南汇丰达化工有限公司）。甲基纤维素（西安泰华医药科技有限公司）、枸橼酸（西安泰华医药科技有限公司）、枸橼酸钠（西安泰华医药科技有限公司）、柠檬黄（西安泰华医药科技有限公司）、香精（湖北武汉新河生物工程有限责任公司）、蔗糖（湖北武汉新河生物工程有限责任公司）。
1.5试药：头孢氨苄干混悬剂
2测定方法确定
2.1色谱条件
頭孢氨苄水溶液在pH8.5以下较稳定。依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下。流动相：水-乙腈-3.86%醋酸钠溶液-醋酸（800∶180∶20∶0.01），检测波长：254nm，流速：1.0m·min-1。柱温：30℃。理论板数按头孢氨苄峰计算应不得低于2000。
2.2对照品溶液的制备
精密称取头孢氨苄对照品适量，置容量瓶中，加流动相制成每1mL含20μg的溶液，即得。
2.3供试品溶液的制备
取头孢氨苄干混悬剂适量，研细，精密称取，加5毫升流动相，超声2分钟，过滤，滤液转移至10毫升容量瓶内，即得。
2.4专属性试验
取甲基纤维素、枸橼酸、枸橼酸钠、柠檬黄、香精、蔗糖等制成阴性样品，依上述方法测定，结果在头孢氨苄出峰处阴性液无色谱峰，结果阴性试验没有干扰，表明本方法专属性良好。
2.5精密度试验
精密称取头孢氨苄对照品适量，加流动相使溶解，制成浓度为20μg·mL-1的供试品溶液。照上述色谱条件，精密吸取10μl，连续进样6次，记录峰面积。结果，RSD=0.89%，表明本方法精密度良好。
2.6对照品的线性考察
精密称取头孢氨苄对照品20mg，置250ml容量瓶中，加入流动相溶液使溶解并稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取0.5、1.5、2.5、3.0、3.5、4.5mL，置于5mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。分别精密上述溶液吸取10μL，注人液相色谱仪，依照2.1项下的色谱条件测定，记录色谱峰。以峰面积（Y）为纵坐标，对照品进样量（X）为横坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。结果表明，头孢氨苄在8～80μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。
2.7准确度试验
精密称取已知含量的样品6份，分别加入一定量的头孢氨苄对照品，上述方法进行测定，计算回收率，平均回收率为99.1%，RSD=0.99%。结果表明此方法的回收率良好。
3结论
头孢氨苄干混悬剂适用于流行性感冒，气肿疽、恶性水肿、坏死杆菌病、等所引起的败血性高热（41～43℃）或持续低温（37℃以下）等，是临床常用药物。本实验分别考察磷酸盐缓冲液（pH4.5）-甲醇-乙腈（80：10：10），甲醇-0.2%磷酸溶液（40：60），甲醇-水（67：33），乙腈-0.02 mol/L磷酸二氢钾溶液 （pH 6.5）（36：64），水-乙腈-3.86%醋酸钠溶液-醋酸（800∶180∶20∶0.01）不同比例的流动相，结果以水-乙腈-3.86%醋酸钠溶液-醋酸（800∶180∶20∶0.01）为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用水-乙腈-3.86%醋酸钠溶液-醋酸（800∶180∶20∶0.01）为流动相。本实验表明此方法可用于头孢氨苄干混悬剂中头孢氨苄的含量测定。头孢氨苄干混悬剂中头孢氨苄的含量为标示量的95-105%。
参考文献：
[1]胡佳丽；于东升；刘小雷；云彩麟；李莉；刘彩虹；张帆；陈艳；邹明强；荧光免疫层析法快速测定牛奶中头孢氨苄残留量[J]；中国食品卫生杂志；2014年04期
[2]卞素敏；扈洪波；邢仕歌；张悦；熊齐荣；钟强；金涌；储晓刚；ELISA法检测牛奶中头孢氨苄残留[J]；食品科学；2013年20期
[3]张健；王长远；刘琦；郭鑫金；苍健；孟强；Taiichi Kaku；刘克辛；JBP485与头孢氨苄相互作用的药动学研究[A]；第九届全国药物和化学异物代谢学术会议论文集[C]；2009年
[4]姚晔；余沐洋；邓宁；何建波；；高效毛细管电泳分离检测5种β-内酰胺类抗生素[A]；中国化学会第27届学术年会第09分会场摘要集[C]；2010年
[5]郭玄；于雪荣；李士阔；张秀真；沈玉华；王阳；离子液体[BMIM]BF_4的微波合成及其在萃取头孢氨苄中的应用[J]；化学研究与应用；2010年12期