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摘 要：以红蓝草为原料，提取多糖并对其抗氧化性进行研究。采用酶提法联合溶剂提取法，提取红蓝草粗多糖，经Sevage法脱蛋白后，测定红蓝草多糖的含量，并研究其对有机自由基DPPH的清除效果。结果显示，红蓝草多糖对有机自由基DPPH的IC50为121.50mg/L。
关键词：红蓝草;多糖;DPPH清除法;抗氧化性
1引 言
多糖是由多个单糖通过特定的化学键连接而成的，具有广泛生物活性的天然大分子化合物。多糖广泛存在于植物、动物和微生物体内，具有降血糖、抗氧化、提高免疫力等多种生物活性[1]。红蓝草（Peristrophe baphica（Spreng）Bremek）又称红丝线、山蓝，具有清肺止咳，凉血止血的功效[2]。目前对红蓝草的挥发油、黄酮类、萜类等成分的研究较多[3-5]，而多糖的研究鲜见报道。本实验采用DPPH清除法，对红蓝草多糖的抗氧化性能进行研究，为综合开发红蓝草资源提供实验数据参考。
2 实验材料与方
2.1 实验材料
2.1.1供试材料 红蓝草（购买于广西百色市菜市场），烘干、粉碎并过80目。
2.1.2主要仪器与试剂
UV-2700紫外可见分光光度计（日本岛津公司），BS110S电子分析天平（北京赛多利斯电子天平有限公司）。邻苯三酚、邻二氮菲、氯仿、正丁醇等均为国产分析纯。
2.2 实验方法
2.2.1 红蓝草多糖的提取和纯化
使用酶提法与溶剂提取法相结合提取红蓝草多糖。参考文献做法[6]。在脱色多糖粗品溶液中依次加入一定体积的氯仿和正丁醇，震荡混匀，离心分离，经分液漏斗分离，重复操作3～4次，得到除去蛋白质的多糖溶液。将其浓缩、烘干后得到多糖样品。
2.2.2 葡萄糖标准曲线标定红蓝草多糖的质量浓度
配制系列葡萄糖标准液，并测定490 nm 处吸光度 A 值，得出葡萄糖标准曲线图。根据此标准曲线算出多糖的含量及提取率。样品含量的计算公式如下：
曲线回归方程计算浓度（C）=（A490+0.0264）/0.0132
多糖提取率=（C×v/2）/W×1 000
2.2.3红蓝草多糖对有机自由基DPPH的清除测定步骤
首先在10 mL 比色管中分别加入4.0 m L 257.7 mg/L DPPH 溶液和1.0 mL 95 %乙醇，混匀，参比对象为95 %乙醇液，测出517 nm处A0的吸光值。分别将不同体积的待测样液与体积为4.0 m L，浓度为257.7 mg/L的 DPPH 溶液的溶剂（95 %的乙醇溶液）按顺序倒到量程为10 mL的比色管中，混匀，参比对象为95 %乙醇液，测出517 nm处Ar的吸光值。最后在10 mL 比色管中依次加入4.0 m L 257.7 mg/L DPPH 溶液和不同体积红蓝草多糖样品，待反应结束，参比对象为95 %乙醇液，测出517 nm处As的吸光值。计算自由基清除率（Y）。
3结果与分析
3.1葡萄糖标准曲线标定红蓝草多糖的质量浓度
选取490nm为测定波长。在此波长下，得到不同浓度所对应的吸光度值，然后绘制得到A与c的线性关系图，见图1。经过计算得：A=0.013 2 C+0.0264，相关系数 R2=0.999 5，表明在选定的浓度内，葡萄糖的吸光度与浓度显现出良好的线性关系。相同实验条件下，测定红蓝草多糖的吸光值，用该曲线计算样品中红蓝草多糖的浓度。
3.2红蓝草多糖对有机自由基DPPH的清除实验结果
依照2.2.3的实验步骤和公式，计算获得Y%与参加反应试样液的浓度c，然后绘制得到它们的线性关系图（如图2）。通过计算得到：Y=0.4183c-0.8221，R2=0.9996。由此可以看出Y与c呈良好的线性关系。当清除率 Y 取 50% 则其所对应的 c 值就是 IC50，待测液对有机自由基DPPH清除水平的高低与IC50值成反比。
4 结论
考察红蓝草多糖提取物对DPPH自由基的清除效率，IC50 值为121.50mg/L。实验结果表明，红蓝草多糖具有一定的抗氧化性。红蓝草具有一定的综合开发利用价值，具有开发成功能保健食品、饮料的前景。
参考文献
[1] 秦树森，刘笑甫，张可锋. 红丝线多糖对大鼠急性肝损伤的保护作用[J]. 华西药学杂志，2010，25（05）：559-560.
[2] 韦正，黄秀香，赖红芳.红蓝草的化学成分、药理活性及开发应用[J].天然产物研究与开发，2016，28（12）：2035-2043.
[3] 蒋红芝，陆春何.分光光度法测定红蓝草中总黄酮的含量[J].广西轻工业，2009（09）：18-20.
[4] 谢运昌，蒋小华，张冕.红丝线挥发油的化学成分[J].广西植物，2008（01）：136-138.
[5] 葛利，藍柳凤，暴惠宾，等.山蓝化学成分的初步研究[J].广西植物，2014，34（02）：155-159.
[6] 郭雪峰，岳永德，汤锋，等. 用清除有机自由基 DPPH 法评价竹叶提取物抗氧化能力 [J]. 光谱学与光谱分析，2008，28（7）：1578-1582.
作者简介：谢宇奇（1979-），男，广西靖西人，硕士，高级实验师，研究方向：天然有机化学和光谱分析。
基金项目：广西高校中青年教师基础能力提升项目（KY2016YB419）
关键词：红蓝草;多糖;DPPH清除法;抗氧化性
1引 言
多糖是由多个单糖通过特定的化学键连接而成的，具有广泛生物活性的天然大分子化合物。多糖广泛存在于植物、动物和微生物体内，具有降血糖、抗氧化、提高免疫力等多种生物活性[1]。红蓝草（Peristrophe baphica（Spreng）Bremek）又称红丝线、山蓝，具有清肺止咳，凉血止血的功效[2]。目前对红蓝草的挥发油、黄酮类、萜类等成分的研究较多[3-5]，而多糖的研究鲜见报道。本实验采用DPPH清除法，对红蓝草多糖的抗氧化性能进行研究，为综合开发红蓝草资源提供实验数据参考。
2 实验材料与方
2.1 实验材料
2.1.1供试材料 红蓝草（购买于广西百色市菜市场），烘干、粉碎并过80目。
2.1.2主要仪器与试剂
UV-2700紫外可见分光光度计（日本岛津公司），BS110S电子分析天平（北京赛多利斯电子天平有限公司）。邻苯三酚、邻二氮菲、氯仿、正丁醇等均为国产分析纯。
2.2 实验方法
2.2.1 红蓝草多糖的提取和纯化
使用酶提法与溶剂提取法相结合提取红蓝草多糖。参考文献做法[6]。在脱色多糖粗品溶液中依次加入一定体积的氯仿和正丁醇，震荡混匀，离心分离，经分液漏斗分离，重复操作3～4次，得到除去蛋白质的多糖溶液。将其浓缩、烘干后得到多糖样品。
2.2.2 葡萄糖标准曲线标定红蓝草多糖的质量浓度
配制系列葡萄糖标准液，并测定490 nm 处吸光度 A 值，得出葡萄糖标准曲线图。根据此标准曲线算出多糖的含量及提取率。样品含量的计算公式如下：
曲线回归方程计算浓度（C）=（A490+0.0264）/0.0132
多糖提取率=（C×v/2）/W×1 000
2.2.3红蓝草多糖对有机自由基DPPH的清除测定步骤
首先在10 mL 比色管中分别加入4.0 m L 257.7 mg/L DPPH 溶液和1.0 mL 95 %乙醇，混匀，参比对象为95 %乙醇液，测出517 nm处A0的吸光值。分别将不同体积的待测样液与体积为4.0 m L，浓度为257.7 mg/L的 DPPH 溶液的溶剂（95 %的乙醇溶液）按顺序倒到量程为10 mL的比色管中，混匀，参比对象为95 %乙醇液，测出517 nm处Ar的吸光值。最后在10 mL 比色管中依次加入4.0 m L 257.7 mg/L DPPH 溶液和不同体积红蓝草多糖样品，待反应结束，参比对象为95 %乙醇液，测出517 nm处As的吸光值。计算自由基清除率（Y）。
3结果与分析
3.1葡萄糖标准曲线标定红蓝草多糖的质量浓度
选取490nm为测定波长。在此波长下，得到不同浓度所对应的吸光度值，然后绘制得到A与c的线性关系图，见图1。经过计算得：A=0.013 2 C+0.0264，相关系数 R2=0.999 5，表明在选定的浓度内，葡萄糖的吸光度与浓度显现出良好的线性关系。相同实验条件下，测定红蓝草多糖的吸光值，用该曲线计算样品中红蓝草多糖的浓度。
3.2红蓝草多糖对有机自由基DPPH的清除实验结果
依照2.2.3的实验步骤和公式，计算获得Y%与参加反应试样液的浓度c，然后绘制得到它们的线性关系图（如图2）。通过计算得到：Y=0.4183c-0.8221，R2=0.9996。由此可以看出Y与c呈良好的线性关系。当清除率 Y 取 50% 则其所对应的 c 值就是 IC50，待测液对有机自由基DPPH清除水平的高低与IC50值成反比。
4 结论
考察红蓝草多糖提取物对DPPH自由基的清除效率，IC50 值为121.50mg/L。实验结果表明，红蓝草多糖具有一定的抗氧化性。红蓝草具有一定的综合开发利用价值，具有开发成功能保健食品、饮料的前景。
参考文献
[1] 秦树森，刘笑甫，张可锋. 红丝线多糖对大鼠急性肝损伤的保护作用[J]. 华西药学杂志，2010，25（05）：559-560.
[2] 韦正，黄秀香，赖红芳.红蓝草的化学成分、药理活性及开发应用[J].天然产物研究与开发，2016，28（12）：2035-2043.
[3] 蒋红芝，陆春何.分光光度法测定红蓝草中总黄酮的含量[J].广西轻工业，2009（09）：18-20.
[4] 谢运昌，蒋小华，张冕.红丝线挥发油的化学成分[J].广西植物，2008（01）：136-138.
[5] 葛利，藍柳凤，暴惠宾，等.山蓝化学成分的初步研究[J].广西植物，2014，34（02）：155-159.
[6] 郭雪峰，岳永德，汤锋，等. 用清除有机自由基 DPPH 法评价竹叶提取物抗氧化能力 [J]. 光谱学与光谱分析，2008，28（7）：1578-1582.
作者简介：谢宇奇（1979-），男，广西靖西人，硕士，高级实验师，研究方向：天然有机化学和光谱分析。
基金项目：广西高校中青年教师基础能力提升项目（KY2016YB419）