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目的
探讨缺血及缺血再灌注对内皮祖细胞(EPCs)增殖、凋亡、迁移能力及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)表达的影响。
方法采集志愿者外周血,进行体外EPCs培养,将细胞分为三组,对照组、缺氧组和缺氧复氧组,四唑盐(MTT)法检测细胞的增殖能力,Transwell小室法检测细胞迁移能力,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot检测iNOS和eNOS的蛋白表达。
结果通过共聚焦显微镜观察,3 d左右细胞基本贴壁,面积变大。单个核细胞培养7 d后,呈集落样生长,多呈梭形。显微镜下三组细胞计数分别为:(1.83±0.92)个、(5.07±0.84)个、(2.11±0.74)个。与对照组(0.24±0.04)比较,缺氧组(0.62±0.06)能够促进EPCs增殖,差异有统计学意义(t=12.142,P<0.05);而缺氧复氧组(0.39±0.06)与对照组差异无统计学意义(P>0.05)。缺氧组(18.28±2.05)和缺氧复氧组(14.08±2.11)细胞迁移数量与对照组(15.14±1.25)比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。缺氧组[(34.57±0.42)%]、缺氧复氧组[(41.08±0.44)%]细胞凋亡率显著高于对照组[(24.83±0.38)%](χ2=13.427,15.084,P<0.05);缺氧复氧组细胞凋亡率显著高于缺氧组(χ2=9.657,P<0.05)。与对照组比较,缺氧组、缺氧复氧组iNOS、eNOS表达显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。
结论缺血能够促进EPCs增殖、增加iNOS、eNOS表达,但再灌注治疗后EPCs表达下调。