LGR5 shRNA真核表达载体的构建及在MKN28细胞的干扰效果检测

来源 :河北大学学报：自然科学版 | 被引量 : 0次 | 上传用户：i_love_snj

【摘要】

：

构建并鉴定LGR5的shRNA真核表达载体,研究其对胃腺癌细胞LGR5基因表达的抑制作用.根据GenBank数据库提供的LGR5cDNA序列,选择设计一段靶向LGR5的shRNA序列,经退火成互补双链,

【作者】

：

谢园园曹文静赵帅樊武舫吴琛

【机构】

：

河北大学生命科学学院

【出处】

：

河北大学学报：自然科学版

【发表日期】

：

2013年6期

【关键词】

：

LGR5基因 shRNA真核表达载体胃腺癌细胞MKN28 LGR5 short hairpin RNA eukaryotic expression vect

【基金项目】

：

国家自然科学基金资助项目（30800180）, 河北省自然科学基金资助项目（C2009000191 C2013201112）, 河北省教育厅科学研究计划项目（2008-106）, 河北省教育厅优秀青年基金资助项目（Y2012024）

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构建并鉴定LGR5的shRNA真核表达载体,研究其对胃腺癌细胞LGR5基因表达的抑制作用.根据GenBank数据库提供的LGR5cDNA序列,选择设计一段靶向LGR5的shRNA序列,经退火成互补双链,克隆到质粒pGPU6/GFP/Neo中,构建重组载体并测序鉴定.将构建成功的特异性表达载体（pGPU6/GFP/Neo-LGR5）转染人胃腺癌细胞系后,应用荧光显微镜分析转染效率.利用荧光实时定量PCR对细胞内源性LGR5的表达进行检测.测序结果表明：靶向LGR5的重组pGPU6/GFP/Neo-LGR5载

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