【摘 要】
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目的 制备重组BIG-3(BMP-2 induced gene 3 Kb,BIG-3)逆转录病毒并初步探讨其对人骨髓基质细胞生物学功能的影响.方法将pGEX 4T-2-BIG-3和pMSCVpuro双酶切,回收凝胶,行连接反
【机 构】
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第四军医大学西京医院全军骨科研究所,西安,710032;西北大学生命科学学院
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目的 制备重组BIG-3(BMP-2 induced gene 3 Kb,BIG-3)逆转录病毒并初步探讨其对人骨髓基质细胞生物学功能的影响.方法将pGEX 4T-2-BIG-3和pMSCVpuro双酶切,回收凝胶,行连接反应,连接产物转化DH5 α感受态细胞,提取质粒,采用菌液PCR方法鉴定所提质粒,以此质粒转染PT67细胞制备重组BIG-3逆转录病毒并用PCR法鉴定;培养人骨髓基质细胞,待其达60%汇合时加入含重组BIG-3逆转录病毒的细胞培养上清,嘌罗霉素筛选,筛选持续10d后所得细胞行碱性磷酸酶染色和钙结节染色.结果 重组质粒pMSCVpuro-BIG-3的菌液PCR法和重组BIG-3逆转录病毒的PCR法电泳图片均在1Kb处有清晰的单一条带,符合预期目的,碱性磷酸酶染色和钙结节染色均呈强阳性.结论 成功制备BIG-3逆转录病毒,BIG-3可使人骨髓基质细胞向成骨细胞方向分化.
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