【摘 要】
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目的 比较不同方法提取猕猴肺成纤维细胞的效率及对细胞相关功能的影响，为获得类似人肺成纤维细胞提供有效方法。方法 采用两种猕猴肺成纤维细胞的提取方法，组织块黏附法和胶原酶联合消化+组织黏附法。倒置显微镜观察细胞形态，免疫荧光鉴定猕猴肺成纤维细胞，CCK-8检测细胞活力，流式细胞仪检测肺成纤维细胞标志物α-SMA的表达，凋亡试剂盒检测细胞凋亡，Western blot检测细胞α-SMA蛋白水平表达。结
【基金项目】
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安徽高校重点科研平台协同创新项目（编号：GXXT-2020-065）；
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目的 比较不同方法提取猕猴肺成纤维细胞的效率及对细胞相关功能的影响，为获得类似人肺成纤维细胞提供有效方法。方法 采用两种猕猴肺成纤维细胞的提取方法，组织块黏附法和胶原酶联合消化+组织黏附法。倒置显微镜观察细胞形态，免疫荧光鉴定猕猴肺成纤维细胞，CCK-8检测细胞活力，流式细胞仪检测肺成纤维细胞标志物α-SMA的表达，凋亡试剂盒检测细胞凋亡，Western blot检测细胞α-SMA蛋白水平表达。结果 组织黏附法贴壁的组织块72 h后可见小而亮的细胞爬出，4～5 d后细胞小范围爬出，呈长梭形；7 d后可见细胞大范围爬出，形成单层细胞，传代后细胞均呈长梭形。用胶原酶联合消化+组织黏附法处理后24 h即可见小而亮的细胞从组织块中爬出，48 h后可见细胞大范围爬出，细胞呈长梭形；4～5 d后可形成单层细胞，传代后的细胞均呈长梭形，用免疫荧光鉴定均表达α-SMA。实验结果显示胶原酶联合消化+组织黏附法提取的肺成纤维细胞的活力明显高于组织黏附法所得细胞活力。TGF-β1刺激肺成纤维细胞后，胶原酶联合消化+组织黏附法提取的细胞增殖更快，α-SMA蛋白表达更高。结论 两种方法均能体外分离出猕猴肺成纤维细胞，胶原酶消化法提取猕猴肺成纤维细胞所需的时间较短且状态较好，TGF-β1刺激后相关蛋白水平表达更稳定，是获得猕猴肺成纤维细胞的有效方法，也是获得接近人原代肺成纤维细胞的有效方法。
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